CSF1R-IN-22 (Compound C19), a potent orally administered CSF-1R selective inhibitor (IC50 <6 nM), significantly enhances CXCL9 secretion from M2 macrophages and promotes CD8+ T cell infiltration. Moreover, it amplifies the anti-tumor immune responses in conjunction with anti-PD-1 and triggers apoptosis in tumor cells. Additionally, CSF1R-IN-22 effectively reprograms M2-like TAMs (tumor-associated macrophages) to an M1 phenotype, modulates the tumor microenvironment (TME) by fostering the recruitment of CD8+ T cells, and diminishes the presence of immunosuppressive Tregs and MDSCs [1].

CSF1R-IN-22（0-2500 nM; 1 h）显著抑制 BMDMs 细胞中的 CSF-1R 信号通路的激活[1]。CSF1R-IN-22（30-100 nM; 24 h）能够有效地将 BMDMs 和 HMDMs 细胞中的 M2 型巨噬细胞重新编程为 M1 型巨噬细胞[1]。CSF1R-IN-22（10-100 nM; 20 h）处理的 M2 型巨噬细胞上清液显著抑制 MC-38 和 CT-26 细胞的活力[1]。Western Blot 分析[1]细胞系：BMDMs cells 浓度：10, 30, 100 nM 孵育时间：1 h 结果：剂量依赖性地抑制了 CSF-1R 及其下游信号介质 AKT 和 mTORC1 的磷酸化。凋亡分析[1]细胞系：MC-38, CT-26 cells 浓度：10, 30, 100 nM 孵育时间：20 h 结果：处理后的 M2 巨噬细胞上清液显著增加了 MC-38 和 CT-26 细胞的凋亡率，在 100 nM 浓度组中增加了约 60%。

CSF1R-IN-22（5-20 mg/kg；p.o.；每天一次，持续14天）在携带MC-38皮下肿瘤的C57BL/6小鼠中展示了显著的抗肿瘤活性，增强了细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的活性，高剂量组表现优于PLX3397的效果[1]。当CSF1R-IN-22（20 mg/kg；p.o.；每天一次，持续14天）与100 μg/mouse PD-1抗体联合使用时，抗肿瘤效果更强。CXCL9的表达与生存率显著正相关[1]。在SD大鼠中的药代动力学分析[1]显示，i.v.给药1 mg/kg的AUC 0-t为9126.62 ng·h/mL，t1/2为1.34小时，Cl为0.10 L/h/kg，Vss为0.34 L/kg；p.o.给药10 mg/kg的AUC 0-t为85939.36 ng·h/mL，t1/2为2.41小时，Cl为0.12 L/h/kg，Cmax为10867.65 ng/mL，F为94.2%。在C57BL/6小鼠MC-38肿瘤模型中，CSF1R-IN-22（5,10,20 mg/kg）通过p.o.每天一次给药14天，显著抑制肿瘤生长，肿瘤质量显著低于对照组，并诱导凋亡。在高剂量组，肿瘤体积抑制(TGI)为65%，小鼠30天生存率为70%。观察到M1巨噬细胞标记基因(Nos2, Tnf, Il6, Il1)的mRNA水平增加，以及M2巨噬细胞标记基因(Arg1, Chil3l, Rentla, Mrc1)表达减少。（10 mg/kg和20 mg/kg）剂量组显著提高了CD3+CD8+T细胞比例。随剂量减少肿瘤组织中免疫抑制性Treg细胞和髓源性抑制细胞(MDSCs)比例。在MC-38肿瘤或MC-38-luc模型中，CSF1R-IN-22（20 mg/kg）与PD-1联合给药组肿瘤生物发光强度显著低于单用PD-1抗体或C19的剂量组。联合给药显著增加肿瘤组织中CD3+CD8+T细胞和CTLs的比例，同时显著降低MC-38肿瘤模型中免疫抑制Treg细胞的比例。CD8+T细胞和CTLs的浸润增加与Cxcl9的mRNA表达显著增加有关。联合治疗的小鼠在70天时的生存率为100%，在MC-38肿瘤细胞再接种后91天内，70%克服肿瘤复发。使用CXCL9中和抗体可显著减少凋亡和CD3+CD8+T细胞的比例。