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PAL-AfBPP技术的核心是基于亲和力的探针,这种探针根据可逆配体设计,并配备了一个特殊的光反应基团。当目标 蛋白与探针非共价结合后,通过紫外光照射,光反应基团能够使探针与蛋白质之间形成共价键。通过这种方法标记并富集与 探针结合的蛋白质,并使用活性分子作为竞争分子,在质谱分析中定量检测探针组与竞争组之间蛋白质比例的显著变化,可 以准确识别活性分子的作用靶点。
ABPP主要利用一种基于反应活性的,能够与蛋白形成共价键的小分子探针,这个探针上带有报告基团,如荧光标签或者生物素标签等,可在后续处理中标记并富集蛋白。标记探针后的蛋白可通过串联质谱(LC-MS/MS)进行深入分析。在质谱数据中,比较对照组和活性分子处理组中探针标记位点的比例变化,可识别活性分子的作用靶点和亲和力。
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