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抑制剂 Cocktails
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电话: 400-820-0310邮箱: tech@targetmol.cn
抑制剂&激动剂
问化合物带有盐酸盐离子、硫酸盐离子等是否和其本身有什么区别？盐形式和游离态有什么区别？
答盐和非盐形式化合物的活性分子是一样的，在生物实验中起到的效果也一致，活性和使用方法都是一样的。只是由于呈盐不同，物理性质比如溶解度会有差异。建议您根据溶解、实验需求进行选择。
问如何选择某个靶点的特异性或总的抑制剂？特异性和非特异性的区别是什么？
答抑制剂按照特异性分为广谱 pan 和特异性 selective 两种。Pan 为某个靶点总的抑制剂，对所有亚型或整个家族的成员都有抑制作用。Selective 抑制剂针对某个蛋白激酶的某个亚型或家族中某个成员抑制率特别高或有特异性抑制作用。 一般评价一个抑制剂的抑制效率主要看 IC50 值，IC50 值越低，说明抑制剂效率越高。建议您根据以上几个特征进行综合选择，也可联系技术帮您推荐相关抑制剂。
信号通路
问抑制剂产品应如何储存？
答粉末储存在 -20℃，可以存 3 年以上。 母液一般储存于 -80℃，可以存 1 年以上，建议多分装几管，避免反复冻融。 常用的存于 4℃，可放一周以上。
问产品是否需要避光？
答一般来说，如果有需要避光储存的分子，我们会选择棕色玻璃瓶发货的。
问抑制剂母液的储存方式？
答母液配置完成后，一般储存于 -80℃，可以存 1 年以上。建议多分装几管，避免反复冻融，常用的存于 4 度，可放一周以上。
问收到化合物后，是否需要称量后配制储备液？
答对于小包装，如 1 mg、5 mg、10 mg 等，不建议二次称量。这样会导致化合物损耗，且无法估算。TargetMol 所有产品原装进口，精准称量，您收到后可直接添加相应量溶剂。 对于大包装，如果您需要分批次实验，可每次称量后配制储备液，建议您 10 mg 起称，称量的误差会小一些；当然条件允许，也可以先配制成高浓度母液，分装备用。
问母液配置的计算方法？
答（1） c=n/v=m/M/v 浓度=物质的量/体积=质量/相对分子质量/体积 （2） 官网产品详情页下方有溶液配制表格，可以参考计算好的加入溶剂体积
问是否能直接用缓冲液对抑制剂 DMSO 母液做梯度稀释？
答大部分情况下，都是可以溶解的。但有时，有机试剂直接加入水相介质时会析出。建议将抑制剂先以DMSO做梯度稀释，再将经过稀释的抑制剂加入缓冲液或细胞培养基。有些抑制剂甚至只有在其工作浓度下才能溶于水相。 比如细胞实验中希望终浓度为 1 μM 的话，可以把 10 mM 的 DMSO 母液用 DMSO 稀释到 1 mM，再吸 2 μL 加入到 2 mL 的生理盐水/PBS/细胞培液，终浓度即为 1 μM。 为避免药物析出，稀释前，可将母液和培养基 37℃ 预热，避免温度低造成严重析出。若稀释过程中出现化合物析出的情况，建议您采用超声加热的方法使其复溶。
问如何稀释工作液？
答根据您的工作液浓度，计算母液所需要稀释的倍数和所需母液的体积。建议用水、生理盐水、PBS等溶剂进行稀释，如果是细胞实验，可以使用培养基。 取适当的溶剂缓慢加入到母液中，直到达到您的工作液浓度，可以通过涡旋或者移液枪轻轻吹打帮助混匀。 我们的化合物大部分是脂溶性的，所以在使用 PBS 或者培养基等稀释工作液的时候，会有沉淀析出，这些都是正常现象，大多时候可以通过超声完全溶解。 工作液建议现配现用！
问如何设置母液浓度？
答母液浓度需低于官网给出的溶解度，在这个范围内，根据工作液浓度设置母液浓度，细胞实验中，建议母液浓度设定在工作液浓度的 1000 倍以上。
问如何选择合适的溶剂？
答常用的溶剂包括DMSO、水、乙醇等。建议您根据抑制剂给出的溶解度参考，选择合适的溶剂。如果该抑制剂可以溶于DMSO，建议使用没有吸潮新开封的 DMSO，如果有潮气污染，很容易带来抑制剂降解或难溶的问题。如果该抑制剂可以溶于水，建议您根据实验类型选择无菌水、生理盐水、无菌 PBS 、培养基等作为溶剂。
问如果低于说明书给出的最高溶解度情况下，产品仍未溶解怎么办？
答建议您使用一些辅助溶解方法，如水浴加热至 45℃ 或用超声震荡，加速粉末溶解。
问产品溶解需要超声吗？如果没有超声仪怎么办？
答超声可以加快粉末的溶解速度，如果您的化合物溶解不了，建议您尝试超声。如果您没有超声仪，建议您选择较低母液浓度，或者较少粉末量，尝试溶解。
问超声应使用什么仪器？
答建议使用“超声清洗仪”，不推荐用“超声破碎仪”。
问超声应使用什么样的频率？
答频率建议使用常规的超声清洗频率即可，一般在20 kHz - 100 kHz。
问超声一般需要多久？
答超声时长和溶解的量和浓度都有关，一般建议半个小时左右，如果浓度接近最大溶解度，或者需溶解的粉末较多，建议延长超声时间，并辅以加热。
问超声久了会不会对化合物的结构有影响？
答建议以较低频率对化合物进行超声，不会对化合物的结构造成影响。
问产品的溶解度是多少？
答建议您先查询TargetMol官网、陶术官网，看该抑制剂的产品介绍，找到溶解度信息。如果没有相应信息，建议联系技术对该化合物的溶解度进行测定。
问抑制剂是否需要灭菌？
答如果您使用 DMSO 配制：不建议灭菌，DMSO 本身具有极强的杀菌力，配制好的溶液就是无菌溶液。如果您确实担心的，可以放置 4℃ 冰箱过夜放置即可；依然有顾虑的话，需用有机系专用滤膜过滤。 如果您使用水配制：可以用 0.22 μm 滤膜过滤灭菌。
问抑制剂是否可以高温灭菌？
答大部分产品均通过化学方法合成，反应条件一般在 50-80℃ 之间，因此不建议使用高温灭菌法进行灭菌，建议用 0.22 μm 滤膜过滤灭菌。
问溶解度写的“mg/mL”和“mM”是什么意思？
答mg/mL 与 mM，是两种不同单位的表示方式，所指代的最大溶解度是一样的，可以通过官网网页下方的摩尔浓度计算器进行换算
问溶解度中写的“< 1 mg/mL refers to the slightly soluble or insoluble ”是什么意思？
答这句话指的是，如果溶解度 < 1 mg/mL，那我们就认为它是微溶或不溶的，这是针对写的“DMSO：Insoluble”或“DMSO：slightly soluble”这类化合物的。
问抑制剂加 DMSO 配成母液之后，能否放在常温的环境保存1周？
答不建议这么做，母液配置好分装保存，建议存于 -20℃ 或 -80℃，尽量避免反复冻融。如果您订购的规格很大，可以考虑分装粉末保存，固体粉末是比较稳定的，-20℃ 可以保存三年。
问收到粉状试剂粘壁严重，如何处理？
答建议您用离心机 3000 rpm下离心一会儿,将粉末收集到管底。
问小规格产品，收到瓶子后看不到任何东西？
答由于产品规格小，粉末在运输过程中产生的静电导致过于分散，管壁和盖子上皆会粘着，您可以放心，离心后加入适量溶剂直接配制母液、充分溶解即可。
问收到产品发现冰盒都化了，怎么办？
答一般化合物粉末对温度不敏感，加冰盒是为了防止极端气温，如果冰盒融化不影响产品质量。
问化合物如何用于动物实验？如何确立剂量、给药方式等？
答同一个化合物对不同动物模型、不同疾病模型的用法不一样，建议根据实验目的，查询文献选择用法。 常见的给药方式包括腹腔注射、灌胃等。由于首过效应，一般可以灌胃的也可以腹腔注射，可以腹腔注射的不一定适合灌胃。不同种属的给药剂量可以根据官网的表格换算。但仅供参考，实际应用中可能未必合适或者准确，尽量以具体某种动物给药剂量的参考文献为主。 我们的化合物都可以进行细胞动物实验，但有些化合物还没有用于动物实验的文献，这种情况下，您可以尝试进行动物实验，但我们无法提供使用方式，也无法保证药效。
问抑制剂能否用于动物实验？
答可以的，我们的抑制剂都可以用于动物/体内实验。但有些化合物还没有用于动物实验的文献，这种情况下，建议您先做预实验，确保研究的可行性。
问动物不能耐受 DMSO，给药时 DMSO量应该如何控制？
答对于普通的老鼠，DMSO 的浓度应控制在 10% 以下，对于裸鼠、转基因小鼠、耐受性弱的老鼠等，DMSO 浓度需控制在2%以下。对于首次操作的抑制剂，建议先做溶剂阴性对照，确认溶解对动物无非特异性影响。
问动物实验常用溶解方法？
答首先，您需要确认给药剂量、给药方式。对于具体的产品，优先找引用我们产品的文献里的使用方法，再找其他文献里的配方。 如果没有相关的文献，且该化合物的 DMSO 溶解度比较好，我们推荐通用配方: 10% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80+45% Saline/PBS/ddH2O。溶剂依次加入，尽量溶解后再加入下一个溶剂。正常鼠建议 DMSO 浓度在 10% 以下，裸鼠体弱鼠等配方的 DMSO 浓度建议在 2% 以下，根据溶液是否澄清，助溶剂 PEG300、Tween-80 的比例可以适当调整。如果有其他助溶剂也可以使用。 以上配方仅供参考，体内配方并不是绝对的，需要根据不同情况进行调整。建议先取少量化合物测试配方，再进行大量配制。配完也可以再使用超声、加热等方式助溶，看看能不能澄清一点。 腹腔注射对粉末的溶解度要求比较高，建议购买盐形式化合物。如果给药剂量比较大，也有报道使用混悬液进行腹腔给药的。 对于灌胃给药，且剂量比较大的情况下，建议用 0.5% CMC-Na 配置成均匀混悬液进行给药。
问PEG300 可以用 PEG400 替代吗？
答PEG300 具有适度的粘稠度，有利于药物的溶解和给药过程，同时也能够提供良好的耐受性，不会对动物造成不良影响。PEG400 可以替代 PEG300。 PEG600 不是很建议，因为熔点接近常温。
问Tween-20 可以用 Tween-80 替代吗？
答不建议使用 Tween-20。相较于 Tween-20，Tween-80 的耐受性更好，Tween-80已被用作评估实验药物和毒物的行为影响的工具，且没有明显的副作用。 参考文献：Castro CA， Hogan JB， Benson KA， Shehata CW， Landauer MR. Behavioral effects of vehicles: DMSO， ethanol， Tween-20， Tween-80， and emulphor-620. Pharmacol Biochem Behav. 1995 Apr;50(4):521-6.
问准备进行动物实验，收到大包装粉末后，如何分装溶解？
答根据配制出来的溶液是不是澄清的确定一次性能配多少：如果配制出来是澄清溶液，可以一次性多配制一些，储存于4度冰箱，大概一周配一次，放久了可能会失效；如果配制出来是混悬液，建议每次使用的时候都现配现用。
问抑制剂能否用于细胞实验？
答可以的，我们的抑制剂都可以用于细胞/体外实验。但有些化合物还没有用于细胞实验的文献，这种情况下，建议您先做预实验，确保研究的可行性。
问细胞实验中，抑制剂如何溶解？
答用 DMSO 配置较高浓度母液，母液存于 -80℃，建议多分装几管，一周内使用的存于 4℃，避免反复冻融。实验时用 pbs、生理盐水、培养基、水这些稀释，细胞实验DMSO的终浓度不超过 0.1%。如果超过 0.1%，则需要在做预试验的时候，先进行溶剂阴性对照实验，排除溶剂对细胞的影响。
问得到的杀死细胞的 IC50 与公司网页上 IC50 差距较大怎么办？
答您所测试的IC50是指细胞的增殖抑制实验（半抑制率），细胞增殖抑制实验 IC50值，和网页上的靶点IC50其实是不同的意义。文献里和网页上 IC50其实往往是指对于靶点无细胞实验的抑制率，这样的实验一般是通过激酶或者蛋白纯化实验做出来的，nM 级别的浓度比较常见，但是细胞的增殖抑制实验 IC50 是指细胞的半致死率，同时牵涉到细胞的代谢以及渗透，一般浓度会高一些。 另外，同一个化合物对不同细胞模型的效果也是不同的，建议尝试增加孵育量、延长孵育时间。
问细胞实验中需要加多少抑制剂？
答通常建议您参考同模型实验发表的文献报道；除参考文献报道以外，还需要通过预实验做“剂量-效应曲线”确定最佳作用浓度（浓度梯度）；通过“时间-效应曲线”确定最佳孵育时间（处理时间梯度）。另外，抑制剂的使用量受多种因素影响，包括抑制对象的可接触性、细胞通透性、孵育时间、细胞种类等等。我们建议通过检索文献确定使用抑制剂的起始浓度。 如果有报道的 Ki 值或 IC50 值，可以采用其 5-10 倍的量开始尝试以达到抑制酶活性的最佳效果。 如果抑制剂的 Ki 值或 IC50 值未知，则需要在更广泛的范围尝试抑制剂的使用浓度，并采用 Michaelis-Menten 动力学计算 Ki 值。 一般设立溶解抑制剂时所采用的溶剂作为对照，以排除溶剂的非特异性影响。
问加药后检测结果没有作用，是不是产品质量有问题？
答产品质量没有问题，都是经过两次严格质检的，HNMR确定产品结构，HPLC确定化合物纯度。同一个抑制剂由于实验材料（细胞、动物）的不同，IC50 和实验效果也是不一样的，不能照搬文献报道的方法，应该根据自己的实验设立浓度梯度，得到一个最适合的浓度。
问购买多次产品，发现颜色不同，怎么办？
答首先请您确认批次，如果是同一个批次产品，请联系技术同事核查产品颜色。如果是不同批次，请您放心，颜色不同可能是生产工艺不同而造成的，生产过程中的操作、温度、时间等因素可能会影响产品的颜色。如果您对该批次有疑虑，可在官网下载相应的质检报告，我们是对产品质量负责的。
问期货产品没有纯度啊？这个纯度在哪里看
答期货产品的话，是没有纯度信息，也没有质检信息的。有了现货之后我们会进行质检，测出试剂的纯度和结构等相关信息，并且展示在官网的活性描述上方。
试剂盒
问TargetMol蛋白酶抑制剂是否可以和其他公司的磷酸酶抑制剂一起使用？
答可以一起使用。
问蛋白酶抑制剂 cocktail C0001 使用时加到蛋白液中的有效抑制时间有多久？
答这个我们暂时没有准确的数据，因为它对不同样品不同蛋白的保护程度是不一样的。一般单次提取以后，不加蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白会在 24 h 后发生明显降解，加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以维持 48 h 不降解。如果提取后置于 -20℃ 储存的话，一般加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以至少储存一个月，冻融三次；但时间长了或者冻融次数多了的话，蛋白还是会发生降解的，不同蛋白降解时间不一样的。
问三种磷酸酶抑制剂cocktail的区别
答成分功能均不一样，具体信息可在官网进行查询。用哪个需要根据老师的实验需求确定。C0002的抑制范围会相对C0003广泛一点，如果只想买一支又不确定哪个合适的话，推荐C0002。如果想要更全面的抑制，推荐C0004。
问Cocktail 系列的使用方法？
答在室温下解冻，开盖前请低速离心一下，以便将黏附于管壁的液体甩至管底。然后在实验前以 1:100（v/v）稀释至溶液样品（细胞裂解液或组织提取液）。
问在做加药实验时，药物对 CCK8 测定是否有影响？如何解决？
答有时会有影响。如果药物具有还原性，会和 CCK-8 发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入 CCK-8，测定 450 nm 的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加 CCK-8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加 CCK-8 之前更换培养基，去掉药物的影响。
问使用 CCK8 进行实验后，发现读值低，不变色、没差异等，应该怎么办？
答CCK8 在孵育 1-4 小时后，OD 读值在 1-2 之间为佳，线性关系比较好。关于 CCK8 的使用问题，通常建议调整细胞状态、增加种板数量、改变加药浓度、延长孵育时间等。
问三款 RIPA 裂解液有什么区别？
答RIPA 裂解液(强)、RIPA 裂解液(中)、RIPA 裂解液(弱)的有效裂解成分、裂解强度不同，建议查询官网，有三款RIPA裂解液的比较表。
重组蛋白
问蛋白能保证活性吗？
答我们有现货的产品，有活性数据的话会展示在官网生物活性那栏，没有数据的也不代表就一定没有活性，是我们还没有建立活性检测方法，没有进行测试，但是我们的蛋白都是优先按照有活性的方法去表达纯化的。
问重组蛋白有吗？
答您需要什么种属的蛋白呢，对表达系统和标签有要求吗，用于什么实验？
问重组蛋白产品是如何运输的？
答大部分重组蛋白产品为冻⼲粉，对温度不敏感，在室温下稳定，一般室温或蓝冰运输。对于液体类蛋白，一般采用⼲冰运输。如果您收到产品时发现冰盒已经融化，无需担心，蛋白可以正常使用，短时间内不会影响产品质量。如果特定蛋白在室温下不稳定，我们会提供相应的低温运输方式，以确保产品质量不受影响。
问重组蛋白产品该如何保存？
答1) 存储条件:重组蛋白产品收到后，如不立即使用，应当保存在 -20℃ 至 -80℃ 的条件下。冻干粉可稳定保存 12 个月以上，液体类产品在 -80℃ 条件下可保存 6-12 个月。已复溶的重组蛋白样品需尽快用完，如果不能在一周内用完，需在 -20℃ 至 -80℃ 保存，可保存 3 个月以上\n2) 避免反复融冻:重组蛋白产品应注意避免反复冻融，建议将重组蛋白产品分装成多份。分装冻存时，建议选择含有一定浓度载体蛋白的溶液或培养基复溶产品。产品浓度不低于 100 ug/mL，且每管的体积不小于 20 uL。
问如何将冻干的重组蛋白配置为储备液？
答在打开盖⼦之前，先使用 10000-12000 rpm 的转速进行离心，20-30 秒，将附着在管盖或管壁上的冻⼲粉收集到管底，以避免损失。大多数蛋白可通过加入无菌蒸馏水来重新溶解。如果需要除水以外的其他稀释剂，产品 COA 中会对其进行说明。一般储备液浓度建议不要低于 100 μg/mL，分装储存避免反复冻融。
问为什么重组蛋白的体积和质量与预期不符？
答蛋白冻干粉由蛋白原液冻干而来，冻干粉质量不等同于蛋白质量。由于冻⼲产品的体积大⼩受多种因素影响，包括冻⼲前缓冲液的组分、盐离⼦浓度以及产品本身的浓度等。冻⼲粉可能看上去很多，也可能肉眼不易观察到，这些都是正常现象，请您放心使用。在收到产品后，照常复溶、使用或分装储存即可。
问为什么某些重组蛋白溶液中还需要添加载体蛋白？
答载体蛋白通常被用于提高蛋白的稳定性，防止蛋白在冷冻或解冻过程中粘附在管壁上。塑料管对蛋白有一定的吸附能力，这可能导致蛋白和管壁之间难以分离，导致溶液中蛋白的实际浓度下降，从而影响其活性。为减少这种损失，在长期保存重组蛋白 产品之前，建议添加常用的载体蛋白溶液，例如0.1% BSA（牛血清白蛋白）、5% HSA（人血清白蛋白）、10% FBS（胎牛血清）或 5% 海藻糖等。如果重组蛋白的浓度较低，强烈建议添加适量的载体蛋白。
嗨！很高兴为您提供帮助！
