5(6)-Carboxyfluorescein (5-(and-6)-Carboxyfluorescein mixed isomers) contains a carboxylic acid that can be used to react with primary amines via carbodiimide activation of the carboxylic acid.

使用方法
1. 标记过程：
1）将5(6)-Carboxyfluorescein与含氨基的生物分子（如蛋白质或多肽）反应，形成稳定的共价连接。常用的反应条件为中性或略碱性的pH环境。
2）该反应需要在适当的缓冲液中进行，通常使用磷酸盐缓冲液（PBS）或其他生物兼容的缓冲液。反应时间根据目标分子的浓度和标记的需求调整。
2. 标记后的处理：
1）反应完成后，使用透析或离心方法去除未反应的染料，以确保标记分子纯净。
2）标记的蛋白质或多肽可以用于各种下游应用，如荧光显微镜观察、流式细胞术分析、荧光定量PCR等。
3. pH敏感特性：
5(6)-Carboxyfluorescein具有pH依赖性，其荧光强度在不同pH条件下会有所变化。这使其成为研究细胞内pH变化（如肿瘤微环境中的酸性区域）的一种理想选择。