BCA Protein Quantification Kit

500 T规格的产品组成如下：

• 灵敏度高：最小检测蛋白量达到0.5 μg，检测浓度下限达到25 μg/mL，待测样品体积为1-20 μL。
• 线性范围广：在25-2000 μg/mL浓度范围内有较好的线性关系。
• 操作简单：正常情况下可在45分钟内完成测定，比经典Lowry方法速度快四倍。
• 兼容性好：BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，DTT低于1mM，β-Mercaptoethanol低于0.01%。

1. 蛋白标准品和待测样品的准备
1）向一管30 mg的BSA蛋白标准品中加入1.2 mL蛋白标准品配制液，充分溶解后配制成25 mg/mL的蛋白标准品溶液。配制后储存于-20°C。
2）取适量25 mg/mL的蛋白标准品溶液，用蛋白稀释液稀释至终浓度0.5 mg/mL。可长期储存于-20℃。
注：待测蛋白样品在什么溶液中，蛋白稀释液也宜为相同溶液。也可以用0.9% NaCl或PBS作蛋白稀释液。
3）将0.5 mg/mL的蛋白标准品溶液，按0、1、2、4、8、12、16、20 μL加到96孔板的标准品孔中，再分别加蛋白稀释液补足至20 μL，相当于蛋白标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL。
4）加适当体积待测样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足20 μL，需加蛋白稀释液补足到20 μL。

2. BCA工作液配制
根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5 mL BCA试剂A加100 μL BCA试剂B，混匀，配制成5.1 mL BCA工作液。BCA工作液室温24小时内稳定。

3. 蛋白浓度测定
1）各孔加入200 μL BCA工作液， 37℃放置30 min。
注：也可以60℃放置20 min，或者室温放置2 h。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。注意保持定时和定温，以确保精确定量。
2）用酶标仪测定562 nm波长的吸光度。
3）根据BSA标准品的吸光度，绘制标准曲线（X-蛋白浓度μg/mL；Y-A562）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

• 试剂盒中的A、B液及蛋白标准品配制液室温保存。
• 蛋白标准品（BSA）粉末室温保存，配成溶液后可置于-20℃保存一年。

1. 本方法适合用于96孔板使用酶标仪检测。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液和标准品、样品的用量。
2. 低温或长期保存时，若发现试剂A或试剂B有沉淀，请37ºC温育并搅拌使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。
3. 建议每次测定都做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• C0050-BCA 蛋白浓度测定试剂盒说明书-中文(1.68 MB)