亲和⼒测试

在⽣命科学领域中，研究⽣物分⼦间的相互作⽤对于阐明细胞⽣物学事件、揭⽰疾病发⽣机制以及药物发现都具有重要意义。“有结合才会有功能，有功能⼀定有结合”，结合是候选药物发挥功能的必要条件。⼩分⼦⼀直是分⼦互作研究的热⻔对象，例如化药、中药、植物激素、⾦属离⼦等。TargetMol提供多种体外评价⼩分⼦药物与靶标蛋⽩结合的技术服务，包括SPR（表⾯等离⼦体共振技术）、MST（微量热泳动技术）、BL I（⽣物膜⼲涉技术）、ITC（等温滴定量热法）、DSF（差⽰扫描荧光法）等。

检测⽅法对⽐

差⽰荧光扫描法（DSF）

蛋⽩中的⾊氨酸和酪氨酸的荧光与其所处的环境密切相关。免标记的nanoDSF技术可以准确检测蛋⽩热变性和化学变性过程中内源荧光的变化。通过检测蛋⽩内源荧光的变化来跟踪其折叠状态，荧光信号的⽐值会随温度的增加或化学变性剂浓度的增加⽽变化，从⽽测定蛋⽩稳定性参数Tm值，实现在⾮标记环境下检测蛋⽩的热稳定性或化学稳定性。

表⾯等离⼦体共振技术（SPR）

SPR（SurfacePlasmonResonance）是⼀种发⽣在两种介质表⾯的光学现象，可以由光⼦或电⼦诱导。当光从光密介质射⼊光疏介质时，发⽣全反射现象，会形成消逝波进⼊光疏介质。引起表⾯等离⼦体共振的⼊射⻆称为SPR⻆。SPR现象与⾦属表⾯的折射率相关。当有分析物结合到芯⽚表⾯时，会导致芯⽚表⾯的折射率发⽣改变，从⽽引起SPR⻆度变化。SPR⽣物传感器利⽤SPR⻆的变化来实时监测分⼦间相互作⽤。

⽣物膜⼲涉技术（BLI）

BL（IBio-LayerInterferometry）是⼀种通过检测⼲涉光谱的位移变化来检测传感器表⾯反应的技术。当⼀束可⻅光从光谱仪射出后，在传感器末端的光学膜层的两个界⾯会形成反射光谱，并形成⼀束⼲涉光谱。任何由于分⼦结合或解离⽽形成的膜层厚度和密度变化，会引起⼲涉光谱的位移。位移值能够实时检测，并以反应监测图谱的形式展⽰。在BLI实验中，⼀个分⼦被固定在浸读式传感器表⾯，检测另⼀个可结合的分⼦。当这两个分⼦发⽣结合，会导致传感器产⽣⼲涉位移，通过实时监测位移变化，从⽽得到结合曲线。

等温滴定量热法（ITC）

等温滴定量热法（IsothermalTitrationCalorimetry,ITC）是⽤于量化研究各种⽣物分⼦相互作⽤的⼀种技术，它可直接测量⽣物分⼦结合过程中释放或吸收的热量。通过测量结合过程中的热传递，就能够准确地确定结合常数（KD）、反应化学量（n）、焓（ΔH）和熵（ΔS）。仪器包含⼀个参照池和⼀个样品池。在实验过程中，配体被可控地滴⼊样品池中（同时伴随充分混合），每次滴定会产⽣⼀个热量脉冲，通过对每⼀次滴定时热量的积分并对浓度进⾏归⼀化处理后⽣成摩尔放热量（kcal/mol），对摩尔⽐率（配体/样品）作图，再选择拟合合适的结合模型

（BindingModels），获取结合相关的亲和⼒（KD）、化学结合计量⽐（n）、焓变（ΔH）和熵变（ΔS）。

微量热泳动（MST）

MST（MicroScaleThermophoresis）是⼀种分析⽣物分⼦相互作⽤的技术。该技术基于⽣物分⼦的热泳动现象，使⽤Nanotemper微量热泳动仪通过红外激光进⾏局部加热，从⽽引起分⼦的定向移动。通过荧光分析温度梯度场中分⼦的分布⽐，MST技术能够检测由结合引起的⽣物分⼦的⼤⼩、电荷和⽔化层的变化。该技术记录了激光器在打开前、打开期间和打开后对样品内部红外激光照射区域的荧光变化情况，从⽽实现了较短时间的测定。

特色实验——结合位点验证