RITA (NSC-652287)(NSC-652287) induced cross-links of both DNA-DNA and DNA-protein with no detectable DNA single-strand breaks. RITA, like nutlin-3, can disrupt the p53/Mdm2 interaction.

p53dN:1.5 nM (Kd)

RITA 以野生型p53依赖性方式抑制肿瘤生长.注射5次RITA（0.1 mg/kg）后可使HCT116肿瘤生长被抑制40%,而不影响HCT116 TP53-/- 肿瘤.注射5次 RITA（1 mg/kg）后使p53阳性移植瘤的生长率降低2倍,但不影响p53-null移植瘤.RITA（1或 10 mg/kg）具有较强的抗肿瘤活性.与对照组未处理小鼠相比, RITA（10 mg/kg）使HCT116 肿瘤减小了90%.RITA（10 mg/kg,i.p.）给药小鼠处理1个月,结果显示其耐受性良好,且未观察到明显的体重减轻.

RITA（10 nM）可使细胞周期停滞,使细胞在G2-M 期累积,100 nM时可促使DNA碎片和凋亡的出现,并提高p53 蛋白水平。 作用于A498细胞时,RITA（30 nM）也诱导 DNA-蛋白和DNA-DNA交联产生。同时,RITA不影响top1-调节的超螺旋SV40 DNA松散。 RITA对HCT116 细胞生长有明显抑制作用(97%),对HCT116 TP53-/- 细胞生长也有轻微抑制(13%)。与作用于缺乏 p53或 p53突变的细胞相比,RITA 作用于表达野生型 p53的细胞可更有效抑制生长。作用于肿瘤细胞时,由于细胞质 (S100)组分的累积,RITA 显示出不同毒性的高度选择性。RITA与全长p53结合,而不是谷胱甘肽S-转移酶的蛋白或HDM-2。RITA也抑制包括 ACHN 和 UO-31在内的其他肾脏细胞系生长（IC50：13 μM 和 37 μM）。RITA 阻断p53与HDM-2相互作用和p53 泛素化。RITA使与p53共沉淀的HDM-2的量显著降低,尽管这两种蛋白是上调的。RITA阻断 6XHis标记的 His-HDM-2蛋白与纯化GST-p53间的相互作用。通过促进p53Ser46磷酸化,RITA可诱导凋亡。 RITA诱导 p53激活,且出现磷酸化的MKK-4、ASK-1和 c-Jun的上调。其还诱导JNK信号激活。核磁共振的结果显示,RITA不会阻断MDM2的N-末端p53结合域(第 1-118位残基)和p53 (第1-312位残基)之间复合体的形成,这可能与RITA的结合需要p53的天然构象有关。

The inhibition profile of cabozantinib against a broad panel of 270 human kinases is determined using luciferase-coupled chemiluminescence,?33P-phosphoryl transfer, or AlphaScreen technology. Recombinant human full-length, glutathione?S-transferase tag, or histidine tag fusion proteins are used, and half maximal inhibitory concentration (IC50) values are determined by measuring phosphorylation of peptide substrate poly (Glu, Tyr) at ATP concentrations at or below the?Km?for each respective kinase. The mechanism of kinase inhibition is evaluated using the AlphaScreen Assay by determining the IC50?values over a range of ATP concentrations.

Examination to assess susceptibility of cells to RITA (0.1 nM - 1 mM) is done using the XTT assay. Cells are inoculated into 96-well flat-bottom plates at a density of 1500 cells per well and incubated for 24 hours at 37 °C in a humidified 5% CO2 5% air atmosphere. Serial concentrations of RITA in DMSO are added to the wells, and sensitivity is determined 48 hours after the addition of RIT(Only for Reference)