DAPI Dihydrochloride (FxCycle Violet) is a cell-permeable fluorescent probe by binding in the minor grove of A-T rich sequences of DNA, used to stain DNA and chromosomes, with a preference for adenine and thymine rich DNA.

DAPI dihydrochloride染色 （贴壁细胞）
一、工作液的配置：

将 1 mg DAPI dihydrochloride 溶解于 1 mL ddH2O/DMSO以获得 1 mg/mL 的储备液。

贴壁细胞使用：例如HeLa细胞:

材料准备：
PBS（磷酸盐缓冲盐水）：用于细胞洗涤和稀释DAPI dihydrochloride。
固定液：常用4%多聚甲醛（PFA）或冰醋酸固定液。
封片液：例如抗荧光衰退剂，帮助保护样品不受光照影响。
荧光显微镜：用于观察染色结果。

二、实验步骤

1. 细胞固定

培养细胞：
在无菌盖玻片上培养贴壁细胞（通常达到70-80%汇合度）。
固定细胞：
1）将培养皿中的培养基吸去，使用PBS洗涤细胞1-2次，去除残留的培养基。
2）加入4% PFA固定液，室温下固定细胞10-30分钟（时间视细胞类型而定）。
3）固定后，使用PBS缓冲液洗涤细胞3次，每次5分钟，以去除多余的固定液。

2. DAPI染色

准备DAPI工作液：
在ddH2O/DMSO中稀释DAPI dihydrochloride，浓度通常为1-10 µg/mL。

染色处理：
将DAPI工作液（100 μL）加入到固定后的细胞上，染色时间为10-30分钟，具体时间可根据细胞类型和实验需求进行调整。

3. 洗涤

用PBS缓冲液轻轻洗涤细胞3次，每次5分钟，以去除未结合的DAPI dihydrochloride。

4. 封片

准备样品：
加入适量的PBS或抗荧光衰退剂的封片液，轻轻覆盖盖玻片。



固定：
用透明胶带或封口剂封住盖玻片的边缘，以防干燥。

5. 显微观察

使用荧光显微镜在特定波长下观察染色结果。细胞核会呈现亮蓝色荧光。

三、注意事项

1.避免光照：DAPI dihydrochloride对光敏感，应尽量避免长时间暴露在光照下，以防染料光衰退。
2.固定时间：不同贴壁细胞的固定时间和条件可能会有所不同，需根据具体细胞类型进行优化。
3.自对照：建议设置阴性对照（不染色的细胞），以确认染色的特异性和有效性。
4.细胞状态：确保细胞在固定前健康生长，避免死细胞影响染色结果。
5.请根据实际情况调整 DAPI dihydrochloride 工作液的浓度。
6.本品仅供科研使用，不用于药物、家庭或其他用途。
7. 为了您的安全和健康，请您穿白大褂，戴一次性手套操作。