PKH67 is a fluorescent cell-binding dye with green fluorescence, capable of staining cell membranes, with excitation/emission (Ex/Em) at 490/502 nm. It is often used in combination with the non-specific red fluorescent dye PKH26 (Ex/Em=551/567 nm) to label cells, detect cell proliferation in vitro, and trace cells both in vitro and in vivo [1] [2].

PKH 67染色液制备：从冰箱取出PKH 67试剂，静置数分钟至室温或37°C水浴片刻后，离心管子以使试剂充分落至管底再开盖。根据检测样品数，用稀释液将探针10倍稀释，再用合适溶液（如无血清培养基，HBSS或PBS）将PKH 67母液25倍稀释成染色工作液。工作液浓度需根据不同细胞和实验体系调整，一般按母液终浓度250倍稀释即可，有些细胞可能需增加浓度。细胞染色：将细胞用100μL染色工作液重悬至约10^7/mL，可原位染色，以染色液覆盖细胞为准。在2-8°C培养细胞15-30分钟，具体时间依细胞而异。（建议细胞在染色工作液中先于37°C孵育5分钟，再于4°C孵育15分钟，以降低内吞作用，助于质膜标记，减少定位细胞质囊泡可能性。）离心去上清，收集细胞，用PBS或无血清培养基洗涤1-2次，加入PBS或无血清培养基重悬。取500μL细胞悬液，用流式细胞仪检测，Ex/Em=490/502 nm。随后可正常培养或荧光显微镜观察标记效果，或适当时间后用流式细胞仪检测细胞增殖或进行其他实验。注意事项：染色浓度依细胞种类与数量而异；PKH 67母液易水解，建议分装保存，≦-20°C冻干保存；PKH 67工作液应现配现用，避免吸湿分解影响染色效果；PKH 67为乙醇溶液，在低温下会凝固，恢复室温液化后离心使试剂至管底再开盖，可37°C水浴片刻使全部融解后使用；不同细胞种类标记后可追踪的代次或时间差异大，请根据实际情况或参考文献进行检测。