DiI (DiIC18(3)) is a lipophilic membrane dye commonly used as a long-term tracer for neurons and other cells. DiI fluoresces very weakly before it enters the cell membrane, and only after it enters the cell membrane can it be excited to emit a strong orange-red fluorescence (λex=549 nm, λem=565 nm).

方法: DiI 染色：
1、用 DMSO 或 EtOH 配制 1-5 mM 的 DiI 染料储备液。避光，分装储存于 -20℃。
2、使用时用生理缓冲液 (如无血清培养基、HBSS 或 PBS) 稀释储备液，得到 1-5 µM DiI 染料工作液。最佳工作浓度必须根据经验确定。
3、悬浮细胞染色：将细胞以 1×10^6/mL 的密度悬浮于染料工作液中。在 37°C 孵育 2-20 min。将已标记的细胞以 1000-1500 rpm 离心 5 min。除去上清液，将细胞重悬于预热的生长培养基中。重复洗涤两次。
4、贴壁细胞染色：在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。将盖玻片从生长培养基中取出，轻轻沥干多余的培养基。吸取 100 μL 染色工作液于盖玻片的一角，轻轻摇动直至覆盖所有细胞。盖玻片在 37°C 孵育 2-20 min。排出染料工作液，用生长培养基清洗盖玻片两至三次。每次清洗时，用预热的生长培养基覆盖细胞，培养 5-10 min，然后沥干培养基。
5、染色的细胞可进行显微镜检测或流式细胞仪检测。