Protein L Immunoprecipitation Kit

• 非特异性吸附低
• 高效率、高产量、低消耗
• 操作灵活、简便
• 实验结果可靠、重复性高

1. 抗原样品制备
选择合适的裂解液处理细胞样品，按照标准步骤制备细胞裂解液，置于冰上备用，或于-20℃长期保存。

2. 免疫复合物的制备
样品用量和孵育时间取决于具体的抗体-抗原体系，因此可能需要优化以实现最大产量。本实验方案适用于2∽10 µg亲和纯化抗体的反应规模，可根据需要按比例放大。
1)在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与2∽10 µg免疫沉淀抗体混合。建议每个免疫沉淀反应的总蛋白量为500∽1500 µg。
2)用Washing Buffer将抗体和样品混合物稀释至300∽500 µL。
3)使用翻转混合仪或手工轻轻翻转离心管混合，在室温下孵育1∽2 h，或在4℃孵育2∽4 h，形成抗原/抗体混合物。

3. 磁珠预处理
1)将免疫沉淀磁珠用漩涡振荡器振荡1 min，使磁珠重新悬浮，取25~50 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)向EP中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤，温和翻转EP管数次，使磁珠重新悬浮。将EP管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复上述洗涤步骤2次。

4. 抗原沉淀反应
1)将步骤2中制备的抗原/抗体混合物加入到装有磁珠的离心管中，轻轻混匀。
2)使用翻转混合仪或手工轻轻翻转离心管混合，在室温下孵育1∽2 h，或在4℃孵育2∽4 h。然后进行磁性分离，收集上清液，置于冰上备用以供后续检测。
3)向离心管中加入1000 µL Washing Buffer进行洗涤，用移液器轻轻吹打，使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然后进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复洗涤两次。

5. 抗原洗脱
提供以下两种抗原洗脱方案，用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入25 µL 1× SDS-PAGE Loading Buffer（自备），混合均匀，95℃加热5 min。然后进行磁性分离或者离心（室温，13000 g, 10 min），收集上清液，进行SDS-PAGE检测。
2)酸性洗脱法：向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer，置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离或者离心，收集上清液。如需中和酸性洗脱液，可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer，调整pH至中性。

4℃，2年。

1. 避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
2. 为了减少磁珠的损失，每次磁性分离的时间不应少于1 min。
3. 在从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
4. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
5. 为确保最佳实验效果，请选择特异性较强的抗体进行免疫沉淀反应。
6. 操作者可根据实际需求，利用抗体结合反应步骤和抗原结合反应步骤中收集的上清液，检测抗体、抗原与磁珠的结合情况。
7. 在IP实验中，不同类型的抗体和抗原结合的亲和力会有所不同。因此，如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果，操作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
8. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。