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规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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40 T | ¥ 910 | 5日内发货 |
产品编号 | 产品名称 | 产品包装 |
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C0116B | Protein G 免疫沉淀磁珠 Protein G Immunomagnetic Beads | 1 mL |
C0124 | 细胞裂解缓冲液 Cell Lysis Buffer | 20 mL |
C0125 | 洗涤缓冲液 Washing Buffer (10×) | 20 mL |
C0126 | 酸性洗脱缓冲液 Acidity Elution Buffer | 4 mL |
C0127 | 中和缓冲液 Neutralization Buffer | 2 mL |
Protein G 免疫沉淀磁珠 | 特性 |
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基质 | 硅基磁珠 |
粒径 | 200 nm |
Human IgG 能力(Antibody Capacity) | ≥0.85 mg hIgG/mL 磁珠 |
磁珠浓度 | 10 mg/mL |
应用推荐 | IP, Co-IP, ChIP, RIP |
1. 抗原样品制备
选择合适的裂解液处理细胞样品,按照标准步骤制备细胞裂解液,置于冰上备用,或于-20℃长期保存。
2. 免疫复合物的制备
样品用量和孵育时间取决于具体的抗体-抗原体系,因此可能需要优化以实现最大产量。本实验方案适用于2∽10 µg亲和纯化抗体的反应规模,可根据需要按比例放大。
1)在离心管中,将每个样品的细胞裂解液与2∽10 µg免疫沉淀抗体混合。建议每个免疫沉淀反应的总蛋白量为500∽1500 µg。
2)用Washing Buffer将抗体和样品混合物稀释至300∽500 µL。
3)使用翻转混合仪或手工轻轻翻转离心管混合,在室温下孵育1∽2 h,或在4℃孵育2∽4 h,形成抗原/抗体混合物。
3. 磁珠预处理
1)将免疫沉淀磁珠用漩涡振荡器振荡1 min,使磁珠重新悬浮,取25~50 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)向EP中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤,温和翻转EP管数次,使磁珠重新悬浮。将EP管放入磁性分离器,静置1 min,进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。重复上述洗涤步骤2次。
4. 抗原沉淀反应
1)将步骤2中制备的抗原/抗体混合物加入到装有磁珠的离心管中,轻轻混匀。
2)使用翻转混合仪或手工轻轻翻转离心管混合,在室温下孵育1∽2 h,或在4℃孵育2∽4 h。然后进行磁性分离,收集上清液,置于冰上备用以供后续检测。
3)向离心管中加入1000 µL Washing Buffer进行洗涤,用移液器轻轻吹打,使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散,然后进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。重复洗涤两次。
5. 抗原洗脱
提供以下两种抗原洗脱方案,用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入25 µL 1× SDS-PAGE Loading Buffer(自备),混合均匀,95℃加热5 min。然后进行磁性分离或者离心(室温,13000 g, 10 min),收集上清液,进行SDS-PAGE检测。
2)酸性洗脱法:向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer,置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离或者离心,收集上清液。如需中和酸性洗脱液,可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer,调整pH至中性。
4℃,2年。
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