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Oligo (dT) Mag Beads
产品编号 C0145
TargetMol 的 Oligo (dT) 磁珠通过表面共价偶联 Oligo (dT)，能够与真核生物 mRNA 尾部的 Poly A 序列互补配对。Oligo (dT) 磁珠可以高效、快速地从真核生物的总 RNA 或直接从动植物组织或细胞裂解物中分离出完整且高纯度的 mRNA。提取的 mRNA 适用于多种分子生物学实验，如 RT-PCR、固相 cDNA 文库构建、RACE 和 Northern blot 等。
| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1 mL | ¥ 950 | 5日内发货 | |
| 5 mL | 询价 | 5日内发货 | |
| 10 mL | 询价 | 5日内发货 |
大包装 & 定制
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TargetMol 的所有产品和服务仅用于科学研究，不能被用于人体，我们也不向个人提供产品和服务。
产品特点
- 磁响应性强
- 特异性高
- 操作简便
- 适合高通量处理
产品应用
- 高效、快速地从真核生物的总 RNA 或直接从动植物组织或细胞裂解物中分离出完整且高纯度的 mRNA。
产品信息
| Oligo (dT) 磁珠 | 特性 |
|---|---|
| Oligo(dT) 偶联量 | ~ 500 pmol/mg 磁珠 |
| 粒径 | 1 µm |
| mRNA 结合量 | 1-2 μg/mg磁珠 |
| 磁珠浓度 | 5 mg/mL |
| 保存溶液 | 1×PBS, 0.01% Tween-20, 0.1% proclin-300 |
自备试剂
以下为常用缓冲液配方，用户可根据需要自行调整。
| 试剂 | 可选配方 |
|---|---|
| 结合缓冲液 Binding Buffer | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1.0 M NaCl, 1 mM EDTA |
| 裂解/结合缓冲液 Lysis/Binding | buffer 100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 500 mM NaCl, 10 mM EDTA, 1% SDS, 5 mM DTT |
| 洗涤缓冲液A Washing Buffer A | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.15 M NaCl, 1 mM EDTA, 0.1% SDS |
| 洗涤缓冲液B Washing Buffer B | 10 mM Tris-HCl ( pH 7.5), 0.15 M NaCl, 1 mM EDTA |
| 洗脱缓冲液 Elution Buffer | Nuclease-Free Water |
注：所有试剂需使用DEPC水配制，使用前平衡至室温。如出现沉淀，可在37℃预热10 min。
操作说明
1. 磁珠预处理
1)将磁珠用漩涡振荡器振荡1 min，使磁珠重新悬浮。取所需量的磁珠悬液放入新的RNase-free离心管中，加入等体积的Binding Buffer，再次重悬磁珠。
2)将离心管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下离心管。
3)加入与最初相同体积的Binding Buffer重悬磁珠备用。
注：如从总RNA中提取mRNA，加入一半初始体积的缓冲液，使磁珠浓缩至10 mg/mL。
2. 从总RNA中纯化mRNA
以100 μg总RNA为例。
1)加入DEPC水将总RNA体积调整至100 μL，再加入等体积100 μL的Binding Buffer。
2)在65℃下加热2 min以解开RNA的二级结构，然后迅速将样品转移至冰上冷却。
3)将200 μL总RNA溶液加到100 μL已经洗涤过的Oligo (dT) 磁珠中，充分混匀。
注：按100 μg总RNA使用1 mg洗涤后并溶于100 μL结合缓冲液的磁珠，参见“磁珠预处理”。
4)在室温下旋转孵育10 min。进行磁性分离，吸去上清液，取下离心管。
5)加入200 μL Washing Buffer B，轻轻混匀。进行磁性分离，吸去上清液，取下离心管。重复此洗涤步骤一次。
注：确保每次洗涤过程中磁珠完全重悬，并在第二次洗涤后尽量去除上清液。
6)根据后续步骤需求，选择以下操作之一：
a)若不需要将mRNA从磁珠上洗脱，可用下游实验所需的酶缓冲液再洗涤磁珠一次。
b)若需洗脱mRNA：小心彻底去Washing Buffer B（注意不要吸取磁珠），然后加入10–20 μL无酶水或10 mM Tris-HCl (pH 7.5)，充分混匀后在室温孵育2 min。接着进行磁性分离，将含mRNA的上清液转移到新的RNase-free离心管中。
注：如需提高洗脱效率，可在65℃-75℃加热洗脱。
3. 从细胞裂解物中分离mRNA
1)使用PBS清洗细胞悬液并离心以获得细胞沉淀，细胞沉淀可立即使用，或用液氮冷冻后置于-80℃备用。
2)在细胞沉淀（1-4×10^6 细胞）中加入1 mL Lysis/Binding buffer，反复吹打几次以确保完全裂解。裂解过程中的DNA释放会使溶液变粘，表示细胞已充分裂解。
3)进行DNA剪切步骤降低裂解液的粘度：将裂解液通过1-2mL注射器和21号针头处理3次。
注：反复剪切可能出现少量泡沫，短暂离心30 s可去除泡沫，泡沫不影响mRNA产量。
4)裂解物可以立即用于mRNA提取，也可冷冻保存在-80℃备用。
5)将清洗后的Oligo (dT) 磁珠放入磁力架中去除上清，加入裂解物并充分混匀。
6)在室温下旋转混合5 min促进mRNA结合，若溶液较粘稠可适当延长时间。进行磁性分离，吸去上清液，取下离心管。
7)对磁珠进行两次洗涤：先用1 mL Washing Buffer A清洗一次，然后再用1 mL Washing Buffer B清洗一次。确保在洗涤过程中彻底重悬磁珠，并在每次洗涤后完全移除上清。
8)根据后续步骤需求，选择以下操作之一：
a)如不需从磁珠中洗脱mRNA（例如后续进行固相cDNA合成），则用 500 μL Washing Buffer B洗涤磁珠一次，再用后续实验所需的酶缓冲液洗涤一次。
b)如需从磁珠中洗脱mRNA，小心彻底去Washing Buffer B（注意不要吸取磁珠），然后加入10–20 μL无酶水或10 mM Tris-HCl (pH 7.5)，充分混匀后在65°C-75°C孵育2 min。接着进行磁性分离，将含mRNA的上清液转移到新的RNase-free离心管中。
注：不同组织/细胞中的mRNA含量可能存在差异。哺乳动物细胞的RNA含量约为每个细胞10-30 pg，其中mRNA占比约1-5%。
保存条件
4℃，2年。
注意事项
- 避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
- 为了减少磁珠的损失，每次磁性分离的时间不应少于1 min。
- 在从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
- 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
- 建议将提取到的mRNA立即用于RT-PCR实验。如需保存，建议在洗脱液中加入RNase抑制剂，将mRNA从磁珠中洗脱后进行冷冻保存。
- 用于mRNA提取的所有缓冲液和耗材都应是RNase-free的。
- 若纯化后的rRNA残留量对后续应用影响较大，可进行二次mRNA纯化。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
嗨！很高兴为您提供帮助！
