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Oligo (dT) Mag Beads

Oligo (dT) Mag Beads

产品编号 C0145
TargetMol 的 Oligo (dT) 磁珠通过表面共价偶联 Oligo (dT),能够与真核生物 mRNA 尾部的 Poly A 序列互补配对。Oligo (dT) 磁珠可以高效、快速地从真核生物的总 RNA 或直接从动植物组织或细胞裂解物中分离出完整且高纯度的 mRNA。提取的 mRNA 适用于多种分子生物学实验,如 RT-PCR、固相 cDNA 文库构建、RACE 和 Northern blot 等。

本产品规格为溶液总体积。
规格价格库存数量
1 mL¥ 9505日内发货
5 mL 询价 5日内发货
10 mL 询价 5日内发货
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实验操作小课堂
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TargetMol 的所有产品和服务仅用于科学研究,不能被用于人体,我们也不向个人提供产品和服务。

Handling Instruction | TargetMol 产品特点

  • 磁响应性强
  • 特异性高
  • 操作简便
  • 适合高通量处理

Handling Instruction | TargetMol 产品应用

  • 高效、快速地从真核生物的总 RNA 或直接从动植物组织或细胞裂解物中分离出完整且高纯度的 mRNA。

Handling Instruction | TargetMol 产品信息

Oligo (dT) 磁珠 特性
Oligo(dT) 偶联量 ~ 500 pmol/mg 磁珠
粒径 1 µm
mRNA 结合量 1-2 μg/mg磁珠
磁珠浓度 5 mg/mL
保存溶液 1×PBS, 0.01% Tween-20, 0.1% proclin-300

Handling Instruction | TargetMol 自备试剂

以下为常用缓冲液配方,用户可根据需要自行调整。

试剂 可选配方
结合缓冲液 Binding Buffer 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1.0 M NaCl, 1 mM EDTA
裂解/结合缓冲液 Lysis/Binding buffer 100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 500 mM NaCl, 10 mM EDTA, 1% SDS, 5 mM DTT
洗涤缓冲液A Washing Buffer A 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.15 M NaCl, 1 mM EDTA, 0.1% SDS
洗涤缓冲液B Washing Buffer B 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.15 M NaCl, 1 mM EDTA
洗脱缓冲液 Elution Buffer Nuclease-Free Water

:所有试剂需使用DEPC水配制,使用前平衡至室温。如出现沉淀,可在37℃预热10 min。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

1. 磁珠预处理
1)将磁珠用漩涡振荡器振荡1 min,使磁珠重新悬浮。取所需量的磁珠悬液放入新的RNase-free离心管中,加入等体积的Binding Buffer,再次重悬磁珠。
2)将离心管放入磁性分离器,静置1 min,进行磁性分离,吸去上清液,取下离心管。
3)加入与最初相同体积的Binding Buffer重悬磁珠备用。
:如从总RNA中提取mRNA,加入一半初始体积的缓冲液,使磁珠浓缩至10 mg/mL。

2. 从总RNA中纯化mRNA
以100 μg总RNA为例。
1)加入DEPC水将总RNA体积调整至100 μL,再加入等体积100 μL的Binding Buffer。
2)在65℃下加热2 min以解开RNA的二级结构,然后迅速将样品转移至冰上冷却。
3)将200 μL总RNA溶液加到100 μL已经洗涤过的Oligo (dT) 磁珠中,充分混匀。
:按100 μg总RNA使用1 mg洗涤后并溶于100 μL结合缓冲液的磁珠,参见“磁珠预处理”。
4)在室温下旋转孵育10 min。进行磁性分离,吸去上清液,取下离心管。
5)加入200 μL Washing Buffer B,轻轻混匀。进行磁性分离,吸去上清液,取下离心管。重复此洗涤步骤一次。
:确保每次洗涤过程中磁珠完全重悬,并在第二次洗涤后尽量去除上清液。
6)根据后续步骤需求,选择以下操作之一:
a)若不需要将mRNA从磁珠上洗脱,可用下游实验所需的酶缓冲液再洗涤磁珠一次。
b)若需洗脱mRNA:小心彻底去Washing Buffer B(注意不要吸取磁珠),然后加入10–20 μL无酶水或10 mM Tris-HCl (pH 7.5),充分混匀后在室温孵育2 min。接着进行磁性分离,将含mRNA的上清液转移到新的RNase-free离心管中。
注:如需提高洗脱效率,可在65℃-75℃加热洗脱。

3. 从细胞裂解物中分离mRNA
1)使用PBS清洗细胞悬液并离心以获得细胞沉淀,细胞沉淀可立即使用,或用液氮冷冻后置于-80℃备用。
2)在细胞沉淀(1-4×10^6 细胞)中加入1 mL Lysis/Binding buffer,反复吹打几次以确保完全裂解。裂解过程中的DNA释放会使溶液变粘,表示细胞已充分裂解。
3)进行DNA剪切步骤降低裂解液的粘度:将裂解液通过1-2mL注射器和21号针头处理3次。
:反复剪切可能出现少量泡沫,短暂离心30 s可去除泡沫,泡沫不影响mRNA产量。
4)裂解物可以立即用于mRNA提取,也可冷冻保存在-80℃备用。
5)将清洗后的Oligo (dT) 磁珠放入磁力架中去除上清,加入裂解物并充分混匀。
6)在室温下旋转混合5 min促进mRNA结合,若溶液较粘稠可适当延长时间。进行磁性分离,吸去上清液,取下离心管。
7)对磁珠进行两次洗涤:先用1 mL Washing Buffer A清洗一次,然后再用1 mL Washing Buffer B清洗一次。确保在洗涤过程中彻底重悬磁珠,并在每次洗涤后完全移除上清。
8)根据后续步骤需求,选择以下操作之一:
a)如不需从磁珠中洗脱mRNA(例如后续进行固相cDNA合成),则用 500 μL Washing Buffer B洗涤磁珠一次,再用后续实验所需的酶缓冲液洗涤一次。
b)如需从磁珠中洗脱mRNA,小心彻底去Washing Buffer B(注意不要吸取磁珠),然后加入10–20 μL无酶水或10 mM Tris-HCl (pH 7.5),充分混匀后在65°C-75°C孵育2 min。接着进行磁性分离,将含mRNA的上清液转移到新的RNase-free离心管中。
:不同组织/细胞中的mRNA含量可能存在差异。哺乳动物细胞的RNA含量约为每个细胞10-30 pg,其中mRNA占比约1-5%。

Handling Instruction | TargetMol 保存条件

4℃,2年。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中,防止干燥。
  2. 为了减少磁珠的损失,每次磁性分离的时间不应少于1 min。
  3. 在从磁珠保存管中取出磁珠之前,应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
  4. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管,以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
  5. 建议将提取到的mRNA立即用于RT-PCR实验。如需保存,建议在洗脱液中加入RNase抑制剂,将mRNA从磁珠中洗脱后进行冷冻保存。
  6. 用于mRNA提取的所有缓冲液和耗材都应是RNase-free的。
  7. 若纯化后的rRNA残留量对后续应用影响较大,可进行二次mRNA纯化。
  8. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。