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规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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1 mL | 询价 | 5日内发货 | |
5 mL | 询价 | 5日内发货 | |
10 mL | 询价 | 5日内发货 |
MYC Tag 琼脂糖磁珠 | 特性 |
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基质 | 琼脂糖磁珠 |
粒径 | 30-100 μm |
配体 | 鼠源抗MYC单克隆抗体(G2) |
结合能力 | ≥0.5 mg MYC标签蛋白/mL磁珠 |
浓度 | 20%(v/v) |
试剂 | 可选配方 |
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洗涤缓冲液 Washing Buffer (1×) | TBST: 50 mM Tris-HCl,150 mM NaCl, 0.1%(v/v) Tween-20,pH7.4 |
酸性洗脱缓冲液 Acidity Elution Buffer | 0.1 M Glycine,0.1% (v/v) Tween-20,pH2.5 |
中和缓冲液 Neutralization Buffer | 1 M Tris-HCl, pH 9.0 |
1. 细胞裂解液制备
选择合适的裂解液处理细胞样品,按照标准步骤制备细胞裂解液,置于冰上备用,或于-20℃长期保存。
2. 磁珠预处理
1)将磁珠用漩涡振荡器振荡1 min,使磁珠重新悬浮,取25~50 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)向EP中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤,温和翻转EP管数次,使磁珠重新悬浮。将EP管放入磁性分离器,静置1 min,进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。重复上述洗涤步骤2次。
3. 免疫沉淀步骤
1)向EP管中加入500 μL制备好的细胞裂解液,将EP管放在旋转混合仪上,在37℃下旋转混合30 min。如结合力较弱,可在室温下孵育1 h,或在4℃下孵育过夜。
2)孵育结束后,进行磁性分离,弃去或保存上清以供后续分析。
3)向EP管中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤。进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管,重复洗涤磁珠3次。
4. 抗原洗脱
提供以下几种抗原洗脱方案,用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入100 μL SDS-PAGE Loading Buffer(自备),混合均匀,95℃加热5 min。然后进行磁性分离或者离心(室温,13000 g, 10 min),收集上清液,进行SDS-PAGE检测。
3)酸性洗脱法:向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer,置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离或者离心,收集上清液。如需中和酸性洗脱液,可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer,调整pH至中性。
4℃,2年。
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