Mouse CD8+ Cell Isolation Kit (positive selection)

1. 小鼠细胞

2. 人源细胞

• 纯度高，可达 95% 以上。
• 样本适用性广，可从 PBMC或者全血中直接捕获目的细胞。
• 磁珠释放技术使得细胞不含微珠、无抗体标记，不影响下游实验。

• 适用从小鼠淋巴器官或其他组织，如脾脏和淋巴结中分选CD8+细胞。

以分选小鼠脾脏中的CD8+ T细胞为例：

1. 制备单细胞悬液：将脾脏放置在70 μm的细胞筛网上研磨，并用预冷的PBS冲洗筛网，将细胞悬液收集至50 mL离心管中，500 g离心5 min。
2. 离心结束后，弃去上清液，加入5 mL红细胞裂解液 (ACK) 并在室温下裂解5 min。随后加入20 mL PBS，500 g离心5 min。
   注：红细胞裂解的时间和用量可根据所用裂解液进行调整，少量红细胞的残留对后续分选和细胞纯度影响不大。
3. 离心结束后，弃去上清液，将脾细胞重悬于PBS中，并用70 μm的细胞筛网过滤。细胞计数完成后，再次以500 g离心5 min。
   注：为避免组织碎片和细胞团块影响后续分选的纯度，细胞悬液需经过细胞筛网过滤。
4. 离心结束后，弃去上清液，将细胞重悬于分选缓冲液中，并调整细胞浓度至1×10^8个细胞/mL。
   注：分选缓冲液推荐配方：PBS，含有2 mM EDTA和2% FBS；或PBS，2 mM EDTA和0.5% BSA。缓冲液需预先经0.22 μm滤膜过滤灭菌。
5. 将500 μL的细胞悬液（含5×10^7个细胞）加入无菌流式管底部，再加入10 μL CD8 Capture Antibody，混匀后在4°C下孵育15 min。
   注：将细胞加入流式管底部时，避免沿管壁添加。若分选更多细胞，CD8 Capture Antibody的用量需按比例增加。根据磁力架的不同，也可使用离心管进行细胞分选。
6. 磁珠预处理：涡旋振荡重悬磁珠，将所需量的磁珠移至1.5 mL离心管中，加入1 mL分选缓冲液，10000 g离心1 min，弃去上清。重复以上洗涤步骤一次。加入与原体积相同的分选缓冲液重悬磁珠。若使用20 μL磁珠进行清洗，则清洗后用20 μL分选缓冲液重悬。
7. 细胞孵育结束后，在流式管中加入100 μL经过预处理的Releasable Magnetic Beads，混合均匀，4°C下孵育15 min。
   注：若分选的细胞数量较多，Releasable Magnetic Beads的用量需按比例增加。若分选的细胞少于1×10^7个，则应将细胞悬液体积补至100 μL，并加入2 μL CD8 Capture Antibody和20μL Releasable Magnetic Beads。
8. 孵育结束后，在流式管中加入2.5 mL分选缓冲液，用移液器轻轻吹打混匀5次，避免剧烈振荡或上下颠倒混匀。将装有细胞的流式管置于磁力架上静置5 min。
9. 弃去上清液。从磁力架取下流式管，迅速加入2 mL分选缓冲液，使用移液器多次轻轻吹打以重新分散磁珠。然后将流式管重新放回磁力架，静置5 min。
10. 重复以上洗涤步骤两次。
    注：充分的清洗有助于确保后续洗脱过程中获得高纯度的目标细胞。
11. 磁吸结束后，弃去上清液。取下流式管，迅速加入1 mL Magnetic Beads Release Buffer重悬磁珠，确保磁珠不干燥，将磁珠悬液转移到1.5 mL离心管中，在室温下旋转孵育10 min。
    注：当分选的细胞数量不同，可以相应调整Magnetic Beads Release Buffer的体积。如果分选的细胞数量少于1×10^7，使用200 μL Magnetic Beads Release Buffer进行洗脱。
12. 孵育结束后，使用移液器反复吹打至少10次，将磁珠悬液转移到一个新的流式管中，加入分选缓冲液至2.5 mL，轻轻吹打混匀后，将流式管放置在磁力架上静置5 min。
13. 此时上清液中含有目标细胞，将上清液转移至一个15 mL离心管中备用。迅速加入1 mL Magnetic Beads Release Buffer重悬磁珠，防止其干燥，并将磁珠悬液转移至1.5 mL离心管中，在室温下旋转孵育10 min。
14. 重复细胞洗脱（步骤12）一次，保留上清液。
15. 将第二次洗脱后的上清液与第一次的上清液混合，500 g离心5 min，弃去上清液，即可获得无磁珠标记的CD8+细胞。
16. 根据实验要求洗涤细胞后，将其重悬于所需的缓冲液或培养基中，便可用于后续的分子生物学或细胞生物学实验。

4℃，2年。

1. 避免冷冻试剂盒各组分。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
2. 在从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
3. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。