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Mouse CD4+ Cell Isolation Kit (positive selection)
产品编号 C0067
TargetMol 的小鼠 CD4+ 细胞分选试剂盒（阳选）提供超顺磁性微珠，共价包被单克隆抗体，对主要表达于鼠辅助性/诱导性 T 细胞的 CD4 膜抗原具有特异性，原理是利用 CD4 Capture Antibody 对 CD4+ 细胞进行标记，然后通过 Releasable Beads 对目标细胞进行捕获，再用 Beads Release Buffer 将磁珠从细胞表面解离，从而得到无磁珠标记的小鼠 CD4+ 细胞。这种快速、温和的分离方法无需使用色谱柱且有助于确保分离出的 CD4+ 细胞的纯度、回收率和存活率都很高。分选得到的 CD4+ 细胞可应用于下游的分子生物学和细胞生物学实验。
| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 2 mL (for 1×10^9 cells) | ¥ 3,800 | 5日内发货 |
大包装 & 定制
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细胞分选的产品推荐
- 小鼠细胞
| 样本类型 | 脾脏 | 淋巴结 | 外周血 | 骨髓 | 肿瘤组织 |
|---|---|---|---|---|---|
| CD3+ T细胞 | C0061 | C0061 | / | / | / |
| CD4+细胞 | C0062（首选），C0067（可选） | C0062（首选），C0067（可选） | C0067 | / | C0067 |
| CD8+细胞 | C0063（首选），C0068（可选） | C0063（首选），C0068（可选） | C0068 | / | C0068 |
| 中性粒细胞 | C0064 | / | C0064 | C0064 | / |
- 人源细胞
| 样本类型 | 外周血 | 脐带血 |
|---|---|---|
| CD3+ T细胞 | C0065 | / |
| CD3+ T细胞 | C0066 | C0066 |
产品组成
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 (for 1×10^9 cells) |
|---|---|---|
| C0067-1 | CD4 Capture Antibody | 200 μL |
| C0067-2 | Releasable Magnetic Beads | 2 mL |
| C0067-3 | Magnetic Beads Release Buffer | 40 mL |
产品特点
- 纯度高，可达 95% 以上。
- 样本适用性广，可从 PBMC或者全血中直接捕获目的细胞。
- 磁珠释放技术使得细胞不含微珠、无抗体标记，不影响下游实验。
产品应用
- 适用从小鼠淋巴器官或其他组织，如脾脏和淋巴结中分选CD4+细胞。
操作说明
以分选小鼠脾脏中的CD4+ T细胞为例：
- 制备单细胞悬液：将脾脏放置在70 μm的细胞筛网上研磨，并用预冷的PBS冲洗筛网，将细胞悬液收集至50 mL离心管中，500 g离心5 min。
- 离心结束后，弃去上清液，加入5 mL红细胞裂解液 (ACK) 并在室温下裂解5 min。随后加入20 mL PBS，500 g离心5 min。
注：红细胞裂解的时间和用量可根据所用裂解液进行调整，少量红细胞的残留对后续分选和细胞纯度影响不大。 - 离心结束后，弃去上清液，将脾细胞重悬于PBS中，并用70 μm的细胞筛网过滤。细胞计数完成后，再次以500 g离心5 min。
注：为避免组织碎片和细胞团块影响后续分选的纯度，细胞悬液需经过细胞筛网过滤。 - 离心结束后，弃去上清液，将细胞重悬于分选缓冲液中，并调整细胞浓度至1×10^8个细胞/mL。
注：分选缓冲液推荐配方：PBS，含有2 mM EDTA和2% FBS；或PBS，2 mM EDTA和0.5% BSA。缓冲液需预先经0.22 μm滤膜过滤灭菌。 - 将500 μL的细胞悬液（含5×10^7个细胞）加入无菌流式管底部，再加入10 μL CD4 Capture Antibody，混匀后在4°C下孵育15 min。
注：将细胞加入流式管底部时，避免沿管壁添加。若分选更多细胞，CD4 Capture Antibody的用量需按比例增加。根据磁力架的不同，也可使用离心管进行细胞分选。 - 磁珠预处理：涡旋振荡重悬磁珠，将所需量的磁珠移至1.5 mL离心管中，加入1 mL分选缓冲液，10000 g离心1 min，弃去上清。重复以上洗涤步骤一次。加入与原体积相同的分选缓冲液重悬磁珠。若使用20 μL磁珠进行清洗，则清洗后用20 μL分选缓冲液重悬。
- 细胞孵育结束后，在流式管中加入100 μL经过预处理的Releasable Magnetic Beads，混合均匀，4°C下孵育15 min。
注：若分选的细胞数量较多，Releasable Magnetic Beads的用量需按比例增加。若分选的细胞少于1×10^7个，则应将细胞悬液体积补至100 μL，并加入2 μL CD4 Capture Antibody和20μL Releasable Magnetic Beads。 - 孵育结束后，在流式管中加入2.5 mL分选缓冲液，用移液器轻轻吹打混匀5次，避免剧烈振荡或上下颠倒混匀。将装有细胞的流式管置于磁力架上静置5 min。
- 弃去上清液。从磁力架取下流式管，迅速加入2 mL分选缓冲液，使用移液器多次轻轻吹打以重新分散磁珠。然后将流式管重新放回磁力架，静置5 min。
- 重复以上洗涤步骤两次。
注：充分的清洗有助于确保后续洗脱过程中获得高纯度的目标细胞。 - 磁吸结束后，弃去上清液。取下流式管，迅速加入1 mL Magnetic Beads Release Buffer重悬磁珠，确保磁珠不干燥，将磁珠悬液转移到1.5 mL离心管中，在室温下旋转孵育10 min。
注：当分选的细胞数量不同，可以相应调整Magnetic Beads Release Buffer的体积。如果分选的细胞数量少于1×10^7，使用200 μL Magnetic Beads Release Buffer进行洗脱。 - 孵育结束后，使用移液器反复吹打至少10次，将磁珠悬液转移到一个新的流式管中，加入分选缓冲液至2.5 mL，轻轻吹打混匀后，将流式管放置在磁力架上静置5 min。
- 此时上清液中含有目标细胞，将上清液转移至一个15 mL离心管中备用。迅速加入1 mL Magnetic Beads Release Buffer重悬磁珠，防止其干燥，并将磁珠悬液转移至1.5 mL离心管中，在室温下旋转孵育10 min。
- 重复细胞洗脱（步骤12）一次，保留上清液。
- 将第二次洗脱后的上清液与第一次的上清液混合，500 g离心5 min，弃去上清液，即可获得无磁珠标记的CD4+细胞。
- 根据实验要求洗涤细胞后，将其重悬于所需的缓冲液或培养基中，便可用于后续的分子生物学或细胞生物学实验。
阴选法和阳选法的比较
| 磁性细胞分选技术 | 阴选法 | 阳选法 |
|---|---|---|
| 样本类型 | 多样 | 多样 |
| 捕获方式 | 磁珠结合非目的细胞 | 磁珠结合目的细胞 |
| 是否需要解离 | 不需要 | 需要 |
| 目的细胞是否有抗体标记 | 无 | 有 |
| 细胞纯度 | >97% | >95% |
| 细胞活性 | 高 | 高 |
| 特点 | 目的细胞纯度高；细胞无抗体、无磁珠残留；细胞活性更好，适用于下游功能实验。 | 样本范围更广泛 |
保存条件
4℃，2年。
注意事项
- 避免冷冻试剂盒各组分。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
- 在从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
- 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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