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Magrose Beads Protein A/G

Magrose Beads Protein A/G

产品编号 C0146
TargetMol 的 Protein A/G 琼脂糖磁珠将 Protein A/G 高密度共价结合到琼脂糖磁珠表面,具备优异的抗体结合能力和较低的非特异性蛋白吸附率。

TargetMol 的 Protein A/G 琼脂糖磁珠适用于蛋白质及蛋白质复合物的免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP),也可用于抗体的纯化。本品适用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。
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TargetMol 的所有产品和服务仅用于科学研究,不能被用于人体,我们也不向个人提供产品和服务。

Handling Instruction | TargetMol 产品特点

  • 非特异性吸附低
  • 高效率、高产量、低消耗
  • 操作灵活、简便
  • 实验结果可靠、重复性高

Handling Instruction | TargetMol 产品应用

  • 蛋白质及蛋白质复合物的免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)
  • 抗体纯化

Handling Instruction | TargetMol 产品信息

Protein A/G 琼脂糖磁珠 特性
基质 磁性琼脂糖磁珠
粒径 30~100 µm
配体 重组Protein A/G蛋白
结合能力 ≥2.0 mg hIgG/mL磁珠
磁珠浓度 20%(v/v)

Handling Instruction | TargetMol 自备试剂

试剂 可选配方
洗涤缓冲液 Washing Buffer TBST: 50 mM Tris-HCl,150 mM NaCl, 0.1%(v/v) Tween-20,pH7.4
酸性洗脱缓冲液 Acidity Elution Buffer 0.1 M Glycine,0.1% (v/v) Tween-20,pH2.5
中和缓冲液 Neutralization Buffer 1 M Tris-HCl, pH 9.0

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

1. 抗原样品制备
选择合适的裂解液处理细胞样品,按照标准步骤制备抗原样品,置于冰上备用,或于-20℃长期保存。

2. 磁珠预处理
1)将磁珠用漩涡振荡器振荡1 min,使磁珠重新悬浮,取25~50 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)加入200 µL Washing Buffer进行洗涤,将EP管放入磁性分离器,静置1 min,进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。重复上述洗涤步骤一次。
3)加入200 µL Washing Buffer重悬磁珠备用。

3. 抗体结合反应
1)抗体工作液的制备:将抗体样品用Washing Buffer稀释至终浓度为5~50 µg/mL,制备成抗体工作液,置于冰上备用。
2)抗体吸附:将步骤2中预处理的磁珠悬液进行磁性分离,吸去上清液。加入200 µL抗体工作液,迅速重悬磁珠,在室温下使用翻转混合仪或手工轻轻翻转EP管混合15 min,然后进行磁性分离,收集上清液,置于冰上备用以供后续检测。
3)洗涤:向EP管中加入200 µL Washing Buffer进行洗涤,轻轻用移液器吹打使磁珠-抗体复合物均匀分散,然后进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。重复上述洗涤步骤一次。

4. 抗原沉淀反应
1)抗原吸附:加入200 µL步骤1中制备的抗原样品,用移液器轻轻吹打,使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。在室温下使用翻转混合仪或手工轻轻翻转EP管混合10 min,以确保抗原与抗体充分结合。如结合力较弱,可在室温下孵育1 h,或在4℃下孵育过夜。
2)洗涤与转移:将上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离,收集上清液,置于冰上以备后续检测。向EP管中加入200 µL Washing Buffer进行洗涤,用移液器轻轻吹打,使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散,然后进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。重复洗涤两次。最后,加入200 µL Washing Buffer,将磁珠-抗体-抗原复合物悬液转移至新的1.5 mL EP管中,并进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。
注:抗原洗脱前,需将磁珠转移到新的EP管,以避免将管壁上非特异性吸附的蛋白一同洗脱。

5. 抗原洗脱
提供以下两种抗原洗脱方案,用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入100 μL SDS-PAGE Loading Buffer(自备),混合均匀,95℃加热5 min。然后进行磁性分离,收集上清液,进行SDS-PAGE检测。
2)酸性洗脱法:向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer,置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离,收集上清液。如需中和酸性洗脱液,可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer,调整pH至中性。

Handling Instruction | TargetMol 保存条件

4℃,2年。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中,防止干燥。
  2. 为了减少磁珠的损失,每次磁性分离的时间不应少于1 min。
  3. 在从磁珠保存管中取出磁珠之前,应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
  4. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管,以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
  5. 为确保最佳实验效果,请选择特异性较强的抗体进行免疫沉淀反应。
  6. 操作者可根据实际需求,利用抗体结合反应步骤和抗原结合反应步骤中收集的上清液,检测抗体、抗原与磁珠的结合情况。
  7. 在IP实验中,不同类型的抗体和抗原结合的亲和力会有所不同。如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果,操作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
  8. 虽然本磁珠表面包被的重组蛋白Protein A/G在极端条件下(如低pH、加热处理)几乎不会脱落,但仍不建议用于分子量约130 kDa目标蛋白的免疫沉淀实验。
  9. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  10. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。