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规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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1 mL | 询价 | 5日内发货 | |
5 mL | 询价 | 5日内发货 |
Protein A/G 琼脂糖磁珠 | 特性 |
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基质 | 磁性琼脂糖磁珠 |
粒径 | 30~100 µm |
配体 | 重组Protein A/G蛋白 |
结合能力 | ≥2.0 mg hIgG/mL磁珠 |
磁珠浓度 | 20%(v/v) |
试剂 | 可选配方 |
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洗涤缓冲液 Washing Buffer | TBST: 50 mM Tris-HCl,150 mM NaCl, 0.1%(v/v) Tween-20,pH7.4 |
酸性洗脱缓冲液 Acidity Elution Buffer | 0.1 M Glycine,0.1% (v/v) Tween-20,pH2.5 |
中和缓冲液 Neutralization Buffer | 1 M Tris-HCl, pH 9.0 |
1. 抗原样品制备
选择合适的裂解液处理细胞样品,按照标准步骤制备抗原样品,置于冰上备用,或于-20℃长期保存。
2. 磁珠预处理
1)将磁珠用漩涡振荡器振荡1 min,使磁珠重新悬浮,取25~50 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)加入200 µL Washing Buffer进行洗涤,将EP管放入磁性分离器,静置1 min,进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。重复上述洗涤步骤一次。
3)加入200 µL Washing Buffer重悬磁珠备用。
3. 抗体结合反应
1)抗体工作液的制备:将抗体样品用Washing Buffer稀释至终浓度为5~50 µg/mL,制备成抗体工作液,置于冰上备用。
2)抗体吸附:将步骤2中预处理的磁珠悬液进行磁性分离,吸去上清液。加入200 µL抗体工作液,迅速重悬磁珠,在室温下使用翻转混合仪或手工轻轻翻转EP管混合15 min,然后进行磁性分离,收集上清液,置于冰上备用以供后续检测。
3)洗涤:向EP管中加入200 µL Washing Buffer进行洗涤,轻轻用移液器吹打使磁珠-抗体复合物均匀分散,然后进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。重复上述洗涤步骤一次。
4. 抗原沉淀反应
1)抗原吸附:加入200 µL步骤1中制备的抗原样品,用移液器轻轻吹打,使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。在室温下使用翻转混合仪或手工轻轻翻转EP管混合10 min,以确保抗原与抗体充分结合。如结合力较弱,可在室温下孵育1 h,或在4℃下孵育过夜。
2)洗涤与转移:将上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离,收集上清液,置于冰上以备后续检测。向EP管中加入200 µL Washing Buffer进行洗涤,用移液器轻轻吹打,使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散,然后进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。重复洗涤两次。最后,加入200 µL Washing Buffer,将磁珠-抗体-抗原复合物悬液转移至新的1.5 mL EP管中,并进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。
注:抗原洗脱前,需将磁珠转移到新的EP管,以避免将管壁上非特异性吸附的蛋白一同洗脱。
5. 抗原洗脱
提供以下两种抗原洗脱方案,用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入100 μL SDS-PAGE Loading Buffer(自备),混合均匀,95℃加热5 min。然后进行磁性分离,收集上清液,进行SDS-PAGE检测。
2)酸性洗脱法:向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer,置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离,收集上清液。如需中和酸性洗脱液,可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer,调整pH至中性。
4℃,2年。
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