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Magrose Beads Protein A (30-150 μm)
产品编号 C0106
TargetMol Protein A 琼脂糖磁珠 (30-150 μm) 是一种抗体纯化磁珠，利用了生物纳米表面技术，使 Protein A 高密度定向包被到 NHS 活化的超顺磁性微球表面通过共价结合而形成的复合微粒。
TargetMol Protein A 琼脂糖磁珠 (30-150 μm) 具有超大比表面积，可大幅度缩短抗体吸附所需的时间。熟练操作可在 10 min 内完成抗体吸附过程，30 min 内完成抗体纯化流程。本产品可重复使用。用户可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别。
本产品规格为溶液总体积。
TargetMol Protein A 琼脂糖磁珠 (30-150 μm) 具有超大比表面积，可大幅度缩短抗体吸附所需的时间。熟练操作可在 10 min 内完成抗体吸附过程，30 min 内完成抗体纯化流程。本产品可重复使用。用户可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别。
本产品规格为溶液总体积。
| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5 mL | ¥ 1,065 | 现货 | |
| 25 mL | ¥ 3,720 | 现货 | |
| 50 mL | ¥ 6,695 | 现货 |
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TargetMol 的所有产品和服务仅用于科学研究，不能被用于人体，我们也不向个人提供产品和服务。
产品特点
- 抗体结合能力极高，非特异性吸附能力极低。
- 操作省时、简便、温和。无需离心，利用磁性分离，极大缩短操作时间；避免离心的机械剪切力对活性蛋白的损伤；避免反复吸液造成填料损失和操作误差。
- 产品稳定性高，多次使用后抗体结合效率无明显衰减。
- 洗脱体系温和，在pH 4.5的条件下洗脱抗体，极大降低酸性敏感抗体在低pH值环境下受到损伤的风险。
- 配基脱落率极低。
- 磁珠可重复使用，再生操作简单。经再生处理后，抗体结合能力可恢复到最初的90%。
产品应用
- 适用于血浆、腹水、组织培养上清液等样品中的抗体纯化，也可用于抗体固定及其它相关研究。
产品信息
| 产品名称 | Magrose Beads Protein A (30-150 μm) (C0106) | Magrose Beads Protein A (10-30 μm) (C0107) | Magrose Beads Protein G (C0108) |
|---|---|---|---|
| 材质 | 琼脂糖 | 琼脂糖 | 琼脂糖 |
| 磁珠粒径范围 | 30-150 µm | 10-30 µm | 30-150 µm |
| 浓度 | 10% (V/V) | 10% (V/V) | 10% (V/V) |
| 抗体结合能力 (mg Human IgG/mL Gel) | 25-30 | 40-45 | 25-30 |
| 配基 | Protein A | Protein A | Protein G |
| 保存液 | PBST, 0.1% (V/V) Proclin 300 | PBS, 0.1% (V/V) Proclin 300, 0.1% (W/V) BSA | PBST, 0.1% (V/V) Proclin 300 |
操作说明
1. 缓冲液准备
以下为常用的缓冲液成分，适用于多数蛋白的纯化，使用时可根据需要进行调整。缓冲液在使用前最好使用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤除菌。
1)Binding Buffer：PBST (pH 7.2~7.4): 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0.1% Tween-20。
2)Elution Buffer：100 mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.0。
3)Neutralization Buffer：1.0 M Tris-HCl, pH 9.0。
2. 样品准备
取100 µL人血清置于1.5 mL EP管中，加入900 µL结合洗涤液后，充分混合均匀。
3. 磁珠预处理
1)蛋白纯化磁珠用漩涡振荡器振荡充分混匀。取200 µL 10%（V/V）磁珠悬液，转移到另一个新的1.5 mL EP管中。将EP管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下离心管。
2)使用1 mL Binding Buffer清洗2次，再次进行磁性分离。此时，管中的磁珠可直接用于抗体分离操作。
注：磁珠用量可根据磁珠对目标抗体的最大结合量进行调整。当目标抗体浓度高于150 µg/mL时，可使用1.2~1.5倍的磁珠量（计算方法：1.5*样品中目标抗体含量/磁珠最大结合量）。若目标抗体浓度较低，如低于70 µg/mL，为了提高抗体回收率，可将磁珠用量增加至3倍。
4. 抗体吸附
1)将步骤2处理后的样品溶液加入到步骤3预处理的磁珠管中，漩涡混匀。
2)在室温（约25℃）下，将EP管置于翻转混合仪中，或者手工轻轻翻转，使样品和磁珠充分接触吸附，翻转约15 min。
3)进行磁性分离，吸去上清液。取下离心管，进行后续的洗涤步骤。
5. 磁珠洗涤
向EP管中加入1 mL Binding Buffer，振荡重悬磁珠后进行磁性分离，吸去上清液。重复洗涤步骤3次。
6. 抗体洗脱
1)在已洗涤的磁珠管中加入0.5~1.0 mL Elution Buffer，使用移液器轻轻吹打或涡旋震荡，使磁珠迅速重悬。
2)在室温（约25℃）下，将EP管置于翻转混合仪中，或手工轻轻翻转，翻转约10 min。
3)进行磁性分离，收集上清液至新的EP管中。
注：建议根据抗体的目标浓度，调整Elution Buffer的用量，使最终洗脱的抗体浓度在0.6~1.2 mg/mL范围内。这样可以确保在第一次洗脱过程中，95%以上的抗体被有效洗脱。如果Elution Buffer用量不足，部分抗体可能残留在磁珠上，影响抗体回收率。
7. 抗体中和
在步骤6洗脱的抗体溶液中，加入适量Neutralization Buffer，通常为洗脱体积的1/10，使最终抗体的pH值达到中性，维持抗体的生物活性，防止失活。
8. 磁珠后处理
1)使用过的磁珠用Elution Buffer清洗2次，进行磁性分离，吸去上清液。
2)接着用Binding Buffer清洗3次，再次进行磁性分离，吸去上清液后。
3)加入200 µL保存液重悬磁珠，并在2~8℃条件下保存，可用于下一次同种蛋白的纯化。
9. 磁珠再生
随着磁珠的多次使用，沉淀蛋白、强疏水性蛋白和脂蛋白等杂质可能会非特异性地附着在磁珠表面。为了确保磁珠的使用效果，建议在连续使用5次后进行磁珠的再生处理。
1)取每1 mL 10%（V/V）磁珠，加入1 mL 1%（V/V）Triton X-100 Regeneration buffer，充分混合后，在室温下将其置于翻转混合仪或手动轻轻翻转混合，10 min后进行磁性分离，吸去上清液。
2)随即加入1 mL Binding Buffer重悬磁珠，再次进行磁性分离，吸去上清液。重复此步骤3次。
3)加入1 mL保存液重悬磁珠，并在2~8℃条件下保存。
保存条件
4℃，2年。
注意事项
- 避免对磁珠进行冷冻、干燥和高速离心等操作。
- 为了减少磁珠的损失，每次磁性分离的时间不应少于1 min。
- 从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
- 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
- 本产品可以重复使用，当纯化性能降低时，建议进行再生处理。
- 使用过的磁珠在重复使用时，建议继续纯化同种蛋白；如果要纯化不同种类的蛋白，建议使用新的磁珠。
- 如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果，操作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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