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规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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5 mL | ¥ 928 | 5日内发货 | |
50 mL | ¥ 4,736 | 5日内发货 |
产品名称 | Magrose Beads COOH (10-30 μm)(C0085) | Magrose Beads COOH (10-30 μm, Ultra-suspension)(C0086) | Magrose Beads COOH (30-150 μm)(C0087) |
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平均粒径 | 10-30 μm | 10-30 μm,超悬浮 | 30-150 μm |
表面羧基含量 | ~60 μmol/mL gel | ~60 μmol/mL gel | ≥120μmol/mL gel |
磁核 | Fe3O4 | Fe3O4 | Fe3O4 |
壳层 | 琼脂糖 | 琼脂糖 | 琼脂糖 |
磁性类型 | 超顺磁性 | 超顺磁性 | 超顺磁性 |
保存溶液 | 20%乙醇 | 20%乙醇 | 20%乙醇 |
磁珠与生物分子的偶联方法,以蛋白A为例:
1. 磁珠预处理
1)将羧基磁珠用漩涡振荡器振荡充分混匀,然后使用移液器吸取100 µL磁珠悬液置于1 mL EP管中。
2)将EP管放入磁性分离器,静置1 min,进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。
3)向EP管中加入200 µL MEST溶液(100 mM MES,pH 5.0,0.05% Tween 20),洗涤2次,每次磁性分离后吸去上清液。
2. 磁珠表面羧基活化
1)向EP管中迅速加入新鲜配制的100 µL EDC 溶液(10 mg/mL,以上述MEST溶液作分散剂)和100 µL NHS(10 mg/mL,以上述MEST溶液作分散剂),漩涡混匀使磁珠充分悬浮。
2)25℃活化30 min。反应期间保持磁珠悬浮,可使用垂直混合仪进行混匀。
注:经过上述步骤处理后,磁珠表面的羧基已经被成功活化,此时可以与带有伯氨基的生物配体进行共价偶联。由于活化状态不稳定,不宜长时间保存,建议尽快进行偶联操作,以确保反应效率和偶联效果。
3. 磁珠与生物配体的共价偶联
1)进行磁性分离,吸去上清液。向EP管中加入50~200 µg生物配体(具体用量、浓度及缓冲液类型需根据实验优化)。
注:配体缓冲液可参考如下几种:100 mM 2-吗啉乙磺酸缓冲液,pH 4.8;200 mM 碳酸氢钠缓冲液,pH 8.3;50 mM 硼酸盐缓冲液,pH8.5;100 mM 磷酸盐缓冲液;100 mM 氯化钠溶液,pH 7.4 等。缓冲液中可加入0.05% Tween 20以提高磁珠分散性,避免缓冲体系中存在除生物配体以外含有伯氨基的试剂。
2)轻柔混匀,25℃偶联2 h,或25℃偶联1 h后放置4℃过夜。偶联保持磁珠悬浮,可使用垂直混合仪进行混匀。
4. 偶联后封闭
1)进行磁性分离,吸去上清液。加入200 µL PBST 溶液(pH 7.2,含1% BSA)重悬磁珠,必要时可使用超声波辅助。
2)25℃反应1 h,以封闭磁珠表面非特异性吸附位点,期间保持磁珠悬浮,可使用垂直混合仪进行混匀。
5. 保存
1)进行磁性分离,吸去上清液。用200 µL PBS溶液(pH 7.2)或保存溶液洗涤3次。
2)然后重新悬浮磁珠于保存溶液中(根据需要调整磁珠浓度)。磁珠保存于4℃,必要时可在保存溶液中加入0.02%(W/V)叠氮化钠(NaN3)以抑制细菌生长。
4℃,2年。
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