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规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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1 mL | ¥ 1,435 | 现货 | |
5 mL | ¥ 5,552 | 现货 | |
10 mL | ¥ 10,095 | 现货 |
产品名称 | C0089 | C0090 | C0091 | C0092 | C0093 | C0094 |
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粒径 | 300 nm | 1 μm | 2 μm | 2.8 μm | 3 μm | 5 μm |
Botin-核酸探针结合能力(24nt)(pmol/mg 磁珠) | ≥450 | ≥450 | ≥350 | ≥300 | ≥200 | ≥300 |
Botin-兔IgG结合能力(μg/mg 磁珠) | ≥15 | ≥15 | ≥15 | ≥10 | ≥5 | ≥10 |
应用方向推荐 | 细胞分选、核酸探针捕获 | 免疫沉淀、DNA蛋白互作 | 免疫沉淀、DNA蛋白互作 | 磁微粒化学发光、中和抗体检测 | 磁微粒化学发光 | 细胞激活 |
磁珠浓度 | 10 mg/mL | 10 mg/mL | 10 mg/mL | 10 mg/mL | 10 mg/mL | 10 mg/mL |
磁珠表面 | 亲水基团 | 亲水基团 | 亲水基团 | 亲水基团 | 亲水基团 | 亲水基团 |
1. 缓冲液准备
以下为常用的缓冲液成分,使用时可根据需要调整盐浓度及pH:
1)Buffer I(适用于结合生物素化核酸):10 mM Tris-HCl(pH 7.5),1 mM EDTA,1 M NaCl,0.01%~0.1% Tween-20。
2)Buffer II(适用于结合生物素化抗体/蛋白):PBS,pH 7.4,含0.05% Tween-20,可根据需要添加0.01%~0.1% BSA。
3)化学发光 Washing buffer:根据需求配制洗液,使用时平衡至室温。
2. 结合生物素化核酸
1)将磁珠瓶用漩涡振荡器振荡20 s,使磁珠重新悬浮。用移液器吸取100 μL磁珠到新的离心管中。将离心管放入磁性分离器,静置1 min,进行磁性分离,吸去上清液,取下离心管。
注:用户可根据生物素化分子的数量,参考产品说明中的磁珠载量,计算所需磁珠量。建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的1-2倍,以达到磁珠饱和。
2)向离心管中加入1 mL Buffer I,盖上管盖,充分振荡使磁珠重新悬浮。进行磁性分离,吸去上清液。
注:如果在步骤1)中使用的磁珠体积超过1 mL,则应加入与磁珠体积等量的Buffer I。
3)重复步骤2)一次。
4)向离心管中加入500 μL用Buffer I稀释的生物素化核酸(使磁珠浓度为2 mg/mL),充分振荡使磁珠重新悬浮。将离心管放在旋转混合仪上,在室温下旋转混合30 min。
5)进行磁性分离,将上清液转移到新的离心管中。
6)按照步骤2)的方法,洗涤磁珠三次。
7)根据后续实验的要求,加入适量的低盐缓冲液,使磁珠重新悬浮。至此,生物素化核酸的结合步骤完成,磁珠可用于后续操作。
8)用户可以通过测量反应前后核酸的浓度,计算结合到磁珠上的核酸量:(反应前浓度-反应后浓度)×反应溶液体积。
3. 结合生物素化抗体/蛋白
1)将磁珠瓶用漩涡振荡器振荡20 s,使磁珠重新悬浮。用移液器吸取100 μL磁珠到新的离心管中。将离心管放入磁性分离器,静置1 min,进行磁性分离,吸去上清液,取下离心管。
注:用户可根据生物素化分子的数量,参考产品说明中的磁珠载量,计算所需磁珠量。建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的1-2倍,以达到磁珠饱和。
2)向离心管中加入1 mL Buffer II,盖上管盖,充分振荡使磁珠重新悬浮。进行磁性分离,吸去上清液。
注:如果在步骤1)中使用的磁珠体积超过1 mL,则应加入与磁珠体积等量的Buffer II。
3)重复步骤2)一次,共洗涤磁珠三次。
4)向离心管中加入1 mL用Buffer II稀释的生物素化抗体/蛋白(使磁珠浓度达到1 mg/mL),充分振荡使磁珠重新悬浮。将离心管放在旋转混合仪上,在室温下旋转混合60 min。
5)进行磁性分离,将上清液转移到新的离心管中。
6)按照步骤2)的方法,洗涤磁珠五次。
7)根据后续实验的需要,加入Buffer II或其他缓冲液,使磁珠重新悬浮。至此,生物素化抗体/蛋白的结合步骤完成,磁珠可用于后续操作。
4. 磁微粒化学发光免疫诊断
1)调整磁珠至合适的浓度(建议0.2-0.8 mg/mL),用漩涡振荡器振荡20 s,使磁珠重新悬浮。用移液器吸取50 μL磁珠至96孔板中,进行磁性分离,吸去上清液,取下96孔板。
2)每孔加入100 μL生物素化捕获抗体,充分振荡使磁珠重新悬浮,置于37℃恒温箱中孵育15 min。进行磁性分离,吸去上清液,取下96孔板。
3)每孔加入200 μL Washing buffer,充分振荡使磁珠重新悬浮,进行磁性分离,吸去上清液。重复此步骤两次,共洗涤三次。
4)每孔加入50 μL待测物标准品或待测样本,充分振荡使磁珠重新悬浮,置于37℃恒温箱中孵育15 min。进行磁性分离,吸去上清液,取下96孔板。
5)每孔加入200 μL Washing buffer,充分振荡使磁珠重新悬浮,进行磁性分离,吸去上清液。重复此步骤两次,共洗涤三次。
6)每孔加入100 μL酶标记抗体,充分振荡使磁珠重新悬浮,置于37℃恒温箱中孵育15 min。进行磁性分离,吸去上清液,取下96孔板。
7)每孔加入200 μL Washing buffer,充分振荡使磁珠重新悬浮,进行磁性分离,吸去上清液。重复此步骤两次,共洗涤三次。
8)每孔加入150 μL底物液,充分振荡使磁珠重新悬浮,避光孵育5 min。
9)使用化学发光仪对96孔板进行读数,进行相应的数据处理。
5. 分离生物素和SA磁珠
如果需要对生物素和SA磁珠进行分离,可采用以下方法:
方法一:0.1% SDS,煮沸5min;
方法二:pH=8.2,含95%甲酰胺的 10mM EDTA 中,65℃ 5min 或90℃ 2min。脱落率95%。
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