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Mag Beads NHS (2 μm)

Mag Beads NHS (2 μm)

产品编号 C0100
TargetMol NHS 磁珠 (2 μm) 表面为 NHS 基团修饰,能够与带有伯胺基团的蛋白和其他分子形成稳定的肽键,用于亲和纯化抗体、抗原和其他生物分子。与传统的羧基、氨基磁珠相比,表面含 NHS 基团的磁珠无需事先采用 EDC/NHS 或戊二醛进行活化,只需简单地将含伯氨基的生物配体溶解在溶解于偶联缓冲液中,室温下将蛋白与 NHS 磁珠混合 1~2 h 便可将生物配体共价偶联到磁珠上。磁珠偶联过程必需在不含任何氨基的缓冲溶剂中进行。人工操作时,使用磁性分离架实现磁珠与溶剂分离。也可采用自动化设备操作,自动化操作适合用于多样品的筛选。

本产品规格为溶液总体积。
规格价格库存数量
50 mL¥ 17,2205日内发货
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TargetMol 的所有产品和服务仅用于科学研究,不能被用于人体,我们也不向个人提供产品和服务。

Handling Instruction | TargetMol 产品特点

  • 简便,无需活化,可直接与生物配体共价偶联。
  • 高效,生物配基偶联效率可达 90% 以上,大大高于羧基磁珠,同时配基的结合载量更高。
  • 快速,1~2 h 便可完成生物配基偶联。
  • 温和,室温或 4℃偶联,偶联体系 pH 为 5~9。
  • 稳定,形成稳定的酰胺键,防止配基脱落。
  • 良好的生物相容性,减少非特异性吸附。

Handling Instruction | TargetMol 产品应用

  • 适用于含伯氨基的蛋白、抗体、酶、多肽、核酸等生物分子的共价偶联。
  • 体外诊断:可以快速、准确地检测疾病标志物。
  • 免疫检测:磁珠与抗体结合用于捕获和检测特定抗原。
  • 细胞分选:磁珠可以与特异性抗体偶联,通过磁性分离技术,从复杂的细胞混合物中分选出目标细胞。
  • 免疫沉淀/共沉淀:可以捕获和富集特定蛋白质或核酸。
  • 蛋白/抗体分离纯化:磁珠具有高效的结合能力和低非特异性吸附,用于纯化特定蛋白质或抗体,提高目标物质的纯度和回收率。

Handling Instruction | TargetMol 产品信息

产品名称 Mag Beads NHS (300 nm)(C0098) Mag Beads NHS (2 μm)(C0100) Magrose Beads NHS (10-30 μm)(C0102) Magrose Beads NHS (30-150 μm)(C0103)
平均粒径 300 nm 2 μm 10-30 μm 30-150 μm
磁珠基材 聚合物 聚合物 琼脂糖 琼脂糖
配基 N-羟基琥珀酰亚胺 N-羟基琥珀酰亚胺 N-羟基琥珀酰亚胺 N-羟基琥珀酰亚胺
配基密度 - - 20~30 µmol/mL 磁珠 20~30 µmol/mL 磁珠
结合能力* ≥30 µg 兔 IgG/mg 磁珠 ≥30 µg 兔 IgG/mg 磁珠 20~30 mg 兔 IgG/mL 磁珠 20~30 mg 兔 IgG/mL 磁珠
磁珠悬液浓度 10 mg/mL 10 mg/mL 20%(V/V) 20%(V/V)
保存溶液 DMAC DMAC 无水异丙醇 无水异丙醇

*磁珠与配体的结合能力与生物配体的本身特性相关,此处仅为参考值。

Handling Instruction | TargetMol 自备试剂

试剂 可选配方
Washing Buffer A 1 mM盐酸,使用前预冷至4℃
Coupling Buffer A 100 mM 2-吗啉乙磺酸MES,pH 4.8(用于等电点小于7的生物分子的偶联)
Coupling Buffer B 200 mM NaHCO3,pH 8.3(用于等电点大于7的生物分子的偶联)
Blocking Buffer 3 M乙醇胺,pH 9.0
Storage Buffer 1×PBS,可根据需求添加0.1% proclin-300或0.05%叠氮化钠

注:
1. 磁珠洗涤
磁珠洗涤步骤应严格遵循说明书的指示,使用冷却的Washing Buffer A进行快速洗涤,以防止在洗涤过程中NHS基团发生水解,影响后续偶联效果。

2. 蛋白偶联中的Coupling Buffer选择
蛋白偶联时,首先需要通过实验筛选出合适的Coupling Buffer。可选择的缓冲液包括:Coupling Buffer A、Coupling Buffer B、50 mM 硼酸溶液(pH 8.5)、以及100 mM 磷酸缓冲液(含100 mM NaCl,pH 7.4)这四种。根据实验结果确定最适合的缓冲体系,以确保高效的偶联反应。

3. 蛋白浓度选择
在确定了合适的Coupling Buffer后,还需要调整蛋白溶液的浓度。蛋白浓度越高,偶联到磁珠上的蛋白量越大。这是因为NHS基团与蛋白的偶联反应和NHS基团的水解反应同时进行,需要找到最佳平衡点。当然,这要根据使用需求进行优化。如果只需要偶联少量蛋白,使用低浓度蛋白即可满足需求,从而降低成本。

4. 封闭步骤
在封闭步骤中,可以使用试剂盒提供的3 M乙醇胺,或选择Tris缓冲液(100 mM Tris-HCl,150 mM NaCl,pH 8.0)进行封闭,封闭时间不得少于2 h。如果化学封闭后背景信号依然较高,可以在封闭后额外添加BSA封闭步骤以进一步降低非特异性吸附。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

以下为基于500 μL Mag Beads NHS磁珠样品的操作步骤,用户可根据实验需求按比例调整:

1. 蛋白溶液配制
1)用Coupling Buffer将待偶联蛋白溶解,配制成浓度为0.1-3.0 mg/mL的蛋白溶液(若使用Magrose Beads NHS,则浓度应≥3.0 mg/mL)。
2)对于已经储存在buffer中的蛋白,需先透析或脱盐,去除含伯氨基的物质后,再用Coupling Buffer配制蛋白溶液。
3)将配制好的蛋白溶液保存在4ºC备用。
注:
a)蛋白浓度≥2.0 mg/mL有助于提高偶联效率,需综合考虑成本与使用需求。
b)蛋白溶液中应避免含有带伯氨基的成分,如Tris、甘氨酸、明胶、BSA等。

2. 磁珠清洗
1)将磁珠用漩涡振荡器振荡充分混匀,然后使用移液器吸取500 µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中。
2)将EP管放入磁性分离器,静置1 min,进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。
3)向EP管中加入1 mL 2~8ºC的Washing Buffer A,涡旋混匀15 s。进行磁性分离,吸去上清液。
:NHS基团易水解,应先预冷Washing Buffer A,再进行洗涤。

3. 蛋白质固定
1)向洗涤后的磁珠中立即加入500 μL蛋白溶液,涡旋混匀30 s。
:需预先配制蛋白溶液,Washing Buffer A洗涤完毕后,应立即加入蛋白溶液进行偶联反应。
2)将EP管涡旋15 s,置于垂直混合仪上,室温混合2 h。为确保均匀反应,可在反应前30 min内,每5 min取下EP管涡旋混匀15 s。之后,每15 min取下EP管涡旋混匀15 s。
:若需要,可以在4℃下过夜反应。
3)进行磁性分离,保留流穿液以备分析。

4. 磁珠封闭
1)向EP管中加入500 μL Blocking Buffer,涡旋30 s,进行磁性分离,吸去上清液。
2)重复上述封闭操作4次。
3)加入500 μL Blocking Buffer,涡旋混匀30 s,将EP管置于垂直混合仪上,室温反应2 h。
4)进行磁性分离,吸去上清液。
5)向EP管中加入1 mL超纯水,混合均匀后进行磁性分离,吸去上清液。

5. 磁珠保存
1)向EP管中加入1 mL Storage Buffer,充分混合,进行磁性分离,吸去上清液,重复此操作2次。
2)最后,加入500 μL Storage Buffer,混合均匀后,将磁珠储存在4ºC备用。
:最终偶联蛋白的磁珠浓度为10 mg/mL(若使用Magrose Beads NHS,则为20% (V/V))。

Handling Instruction | TargetMol 保存条件

4℃,1年。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 避免对磁珠进行冷冻、干燥和高速离心等操作。
  2. 为了减少磁珠的损失,每次磁性分离的时间不应少于1 min。
  3. 从磁珠保存管中取出磁珠之前,应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
  4. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管,以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
  5. 磁珠与溶液混合过程中,如果溶液粘稠导致翻转离心管无法重悬磁珠,可以使用移液器吹打或瞬时漩涡混合,使磁珠充分重悬。
  6. 磁珠对水分敏感。为了保证产品质量,在取样之后需立即盖上瓶盖,并用封口膜密封,于4℃保存。
  7. 由于NHS基团在280 nm处有吸收峰,磁珠偶联蛋白的结合量不能通过OD280测定,可使用BCA试剂盒(C0050)进行测定。
  8. 蛋白稳定剂(如BSA,gelatin)会抑制抗体与磁珠的结合,因此在磁珠偶联抗体过程中,需要确保抗体保存体系中不存在含伯氨基的蛋白稳定剂。
  9. 缓冲液中含有带伯胺的物质会抑制蛋白质偶联到磁珠表面,去除伯胺物质可采用透析和脱盐的方法。
  10. 蛋白质和磁珠的偶联效率因蛋白质种类和性质差异而不同。一般而言,蛋白质浓度为≥3.0 mg/mL时利于蛋白质偶联,对于不同的蛋白其浓度需要优化。
  11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  12. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。