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GFP Tag Agarose

GFP Tag Agarose

产品编号 C0139
绿色荧光蛋白(GFP)及其突变体增强型绿色荧光蛋白(EGFP)广泛用于检测基因表达效率以及目标蛋白的表达和分布。作为标签蛋白,GFP 能使融合的目标蛋白自发荧光,无需依赖抗体或探针,即可实现细胞中目标基因的定位,且受其他物质干扰较小。

Targetmol 的 GFP Tag 琼脂糖凝胶可高效检测和纯化 GFP、EGFP 及其融合蛋白,但不会结合 BFP 标签蛋白。
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TargetMol 的所有产品和服务仅用于科学研究,不能被用于人体,我们也不向个人提供产品和服务。

Handling Instruction | TargetMol 产品特点

  • 使用的抗体与GFP具有极高的亲和力,能够高效捕获裂解上清中的GFP标签蛋白。
  • 免疫沉淀后,通过SDS-PAGE检测,背景信号更干净,更利于鉴定蛋白相互作用。
  • 琼脂糖基质具有低非特异性吸附和良好的兼容性,每毫升的载量超过1 mg,适合进行GFP融合蛋白的大规模纯化。

Handling Instruction | TargetMol 产品应用

  • 高效检测和纯化GFP、EGFP及其融合蛋白,但不会结合BFP标签蛋白。

Handling Instruction | TargetMol 产品信息

GFP Tag 琼脂糖凝胶 特性
基质 高度交联的4%琼脂糖微球
粒径 45-165 μm
配体 Anti-GFP Antibody
载量 >1 mg GFP标签蛋白/mL 介质
最大压力 0.3 MPa,3 bar
试剂耐受 Stable up to 80℃,1 mM DTT,3 M Guanidinium•HCl,8 M Urea,2 M NaCl,2% Nonidet P40 Substitute,1% SDS,1% Triton X-100
保存溶液 1×PBS,0.02% NaN3

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

1. 缓冲液准备
以下为常用的缓冲液成分,使用前建议用 0.22 μm 或 0.45 um 滤膜过滤:
1)平衡/洗杂液:50 mM Tris, 0.15 M NaCl, pH7.4
2)酸性洗脱液:0.1 M glycine HCl, pH3.0
3)中和液:1 M Tris-HCl, pH8.0
4)保存溶液:1×PBS,0.02% NaN3

2. 柱层析
1)将GFP Tag 琼脂糖凝胶装填入适当的层析柱,使用5倍柱体积的平衡液进行平衡,以确保填料处于与目标蛋白相同的缓冲条件下。
2)将样品加入到已经平衡好的琼脂糖凝胶中,并收集流出液。可以多次上样以提高结合效率。
3)用10-20倍柱体积的洗涤液清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,并收集洗涤液。
4)进行酸性洗脱,使用5倍柱体积的酸性洗脱液进行洗脱,随后在洗脱组分中添加洗脱体积十分之一的中和液,调节pH至7.0-8.0,并分管收集。
:酸性洗脱后,填料需立即用平衡液平衡,琼脂糖凝胶在洗脱液中的停留时间不应超过20 min。
5)使用3倍柱体积的洗脱液进行清洗,然后用平衡液调整至中性。
6)用3倍柱体积的保存溶液进行平衡,保存于2-8℃。

3. 静态吸附
1)将适量的GFP Tag 琼脂糖凝胶胶加入层析柱中,流干保护液。随后用5倍柱体积的平衡液进行清洗。
2)将样品溶液加入填料中,在4℃或室温下震荡孵育至少30 min(避免使用磁力搅拌),以确保填料与样品溶液充分混合。
3)孵育结束后,进行离心(5000×g,1 min)或过滤,以收集填料。
4)将收集到的填料装入层析柱中,用平衡液清洗,直到紫外检测稳定。
5)使用酸性洗脱液进行洗脱。
6)参照2中的第5)和第6)步骤进行填料的再生和保存。

4. 免疫沉淀
1)取40 µL的GFP Tag 琼脂糖凝胶(柱体积20 µL)混合液,加入到1.5 mL的离心管中,5000×g离心1 min,吸去上清液。
2)向填料中加入0.5 mL的平衡液,轻轻悬浮填料(以确保填料处于与目标蛋白相同的缓冲体系中,保护蛋白),5000×g离心1 min,吸去上清液。此步骤重复一次。
3)将200-1000 µL的样品加入处理好的填料中,混合均匀。将离心管置于翻转混合仪中轻轻翻转,确保样品与填料充分接触和吸附,室温孵育至少1 h(对于易降解的蛋白,建议添加蛋白酶抑制剂,如C0001,并在2-8℃的层析柜中操作,也可以在冷库中进行)。5000×g离心1 min,吸去上清液,注意不要吸走填料。
4)洗杂:向填料中加入0.5 mL的洗杂液,悬浮填料并轻轻混匀。5000×g离心1 min,吸去上清液。此步骤重复三次,以确保去除非特异性吸附。
5)样品洗脱:根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
a)酸性洗脱:加入100 µL的洗脱液,悬浮填料,室温孵育5 min。5000×g离心1 min,吸去上清液,避免吸到填料,随后用中和液中和。洗脱样品放置在4℃,长时间可储存于-20℃。
b)变性洗脱:每管中加入20 µL的SDS-PAGE Loading Buffer(自备),95℃加热5 min。5000×g离心1 min,收集上清液,进行SDS-PAGE检测。
:变性洗脱后的琼脂糖凝胶不能重复使用。

Handling Instruction | TargetMol 保存条件

4℃,2年。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 凝胶应保存在储存溶液中,防止干燥。
  2. 在从保存管中取出琼脂糖凝胶之前,应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
  3. 本产品已验证能够结合来自于管水母的野生型GFP以及EGFP、YFP等,不结合CFP和其他种属GFP。
  4. 纯化前建议通过Western检测GFP标签融合蛋白表达情况。
  5. DTT可能导致RFP抗体在凝胶上脱落,因此请避免使用含有DTT的细胞裂解液样品。
  6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。