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Flag Tag Magrose Beads

Flag Tag Magrose Beads

产品编号 C0140
Targetmol 的 Flag Tag 琼脂糖磁珠将鼠源抗 DYKDDDDK(Flag)单克隆抗体共价结合到琼脂糖磁珠表面,可特异性地与带有 Flag 标签的蛋白结合。

Targetmol 的 Flag Tag 琼脂糖磁珠可以用于蛋白质及蛋白质复合物的免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或 Pull-down 实验,也可用于 Flag 标签融合蛋白的纯化。本品适用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等来源的抗原样品。
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1 mL 询价 5日内发货
5 mL 询价 5日内发货
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实验操作小课堂
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TargetMol 的所有产品和服务仅用于科学研究,不能被用于人体,我们也不向个人提供产品和服务。

Handling Instruction | TargetMol 产品特点

  • 磁响应性快速
  • 微球分散性优异
  • 非特异性吸附极低
  • 结合位点丰富

Handling Instruction | TargetMol 产品应用

  • 蛋白质及蛋白质复合物的免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)或Pull-down实验。
  • Flag标签融合蛋白的纯化。

Handling Instruction | TargetMol 产品信息

Flag Tag 琼脂糖磁珠 特性
基质 琼脂糖磁珠
粒径 30-100 μm
配体 鼠源抗Flag单克隆抗体(G2)
结合能力 ≥1.0 mg Flag标签蛋白/mL磁珠
浓度 20%(v/v)

Handling Instruction | TargetMol 自备试剂

试剂 可选配方
洗涤缓冲液 Washing Buffer (1×) TBST: 50 mM Tris-HCl,150 mM NaCl, 0.1%(v/v) Tween-20,pH7.4
Flag多肽洗脱缓冲液 Flag Peptide Elution Buffer PBS,1 mg/mL 3× Flag peptide (TP1274),pH 7.4
酸性洗脱缓冲液 Acidity Elution Buffer 0.1 M Glycine,0.1% (v/v) Tween-20,pH2.5
中和缓冲液 Neutralization Buffer 1 M Tris-HCl, pH 9.0

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

1. 细胞裂解液制备
选择合适的裂解液处理细胞样品,按照标准步骤制备细胞裂解液,置于冰上备用,或于-20℃长期保存。

2. 磁珠预处理
1)将磁珠用漩涡振荡器振荡1 min,使磁珠重新悬浮,取25~50 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)向EP中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤,温和翻转EP管数次,使磁珠重新悬浮。将EP管放入磁性分离器,静置1 min,进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管。重复上述洗涤步骤2次。

3. 免疫沉淀步骤
1)向EP管中加入500 μL制备好的细胞裂解液,将EP管放在旋转混合仪上,在37℃下旋转混合30 min。如结合力较弱,可在室温下孵育1 h,或在4℃下孵育过夜。
2)孵育结束后,进行磁性分离,弃去或保存上清以供后续分析。
3)向EP管中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤。进行磁性分离,吸去上清液,取下EP管,重复洗涤磁珠3次。

4. 抗原洗脱
提供以下几种抗原洗脱方案,用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入100 μL SDS-PAGE Loading Buffer(自备),混合均匀,95℃加热5 min。然后进行磁性分离或者离心(室温,13000 g, 10 min),收集上清液,进行SDS-PAGE检测。
2)中性洗脱法:向EP管中加入50 μL Flag Peptide Elution Buffer,置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min(低于37℃时需适当延长孵育时间)。然后进行磁性分离或者离心,收集上清液。为提高抗原回收率,可重复以上步骤。
3)酸性洗脱法:向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer,置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离或者离心,收集上清液。如需中和酸性洗脱液,可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer,调整pH至中性。

Handling Instruction | TargetMol 保存条件

4℃,2年。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中,防止干燥。
  2. 为了减少磁珠的损失,每次磁性分离的时间不应少于1 min。
  3. 在从磁珠保存管中取出磁珠之前,应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
  4. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管,以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
  5. 操作者可根据实际需求,利用抗体结合反应步骤和抗原结合反应步骤中收集的上清液,检测抗体、抗原与凝胶的结合情况。
  6. 在IP实验中,不同类型的抗体和抗原结合的亲和力会有所不同。如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果,操作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
  7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。