Flag Tag Immunoprecipitation Kit

• 非特异性吸附低
• 高效率、高产量、低消耗
• 操作灵活、简便
• 实验结果可靠、重复性高

1. 细胞裂解液制备
使用Cell Lysis Buffer处理细胞样品，按照标准步骤制备细胞裂解液，置于冰上备用，或于-20℃长期保存。

2. 磁珠预处理
1)将免疫沉淀磁珠用漩涡振荡器振荡1 min，使磁珠重新悬浮，取25 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)用蒸馏水将Washing Buffer (10×)稀释为1×，使用Washing Buffer (1×)进行后续实验。向EP中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤，温和翻转EP管数次，使磁珠重新悬浮。将EP管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复上述洗涤步骤2次。

3. 免疫沉淀步骤
1)向EP管中加入500 μL制备好的细胞裂解液，将EP管放在旋转混合仪上，在37℃下旋转混合30 min。如结合力较弱，可在室温下孵育1 h，或在4℃下孵育过夜。
2)孵育结束后，进行磁性分离，弃去或保存上清以供后续分析。
3)向EP管中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤。进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管，重复洗涤磁珠3次。

4. 抗原洗脱
提供以下几种抗原洗脱方案，用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入100 μL SDS-PAGE Loading Buffer（自备），混合均匀，95℃加热5 min。然后进行磁性分离或者离心（室温，13000 g, 10 min），收集上清液，进行SDS-PAGE检测。
2)中性洗脱法：向EP管中加入50 μL Flag Peptide Elution Buffer（PBS，1 mg/mL 3× Flag peptide (TP1274)，pH 7.4），置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min（低于 37℃ 时需适当延长孵育时间）。然后进行磁性分离或者离心，收集上清液。为提高抗原回收率，可重复以上步骤。
3)酸性洗脱法：向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer，置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离或者离心，收集上清液。如需中和酸性洗脱液，可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer，调整pH至中性。

• C0124：-20℃，2年。
• 其余试剂：4℃，2年。

1. 避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
2. 为了减少磁珠的损失，每次磁性分离的时间不应少于1 min。
3. 在从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
4. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
5. 操作者可根据实际需求，利用抗体结合反应步骤和抗原结合反应步骤中收集的上清液，检测抗体、抗原与磁珠的结合情况。
6. 在IP实验中，不同类型的抗体和抗原结合的亲和力会有所不同。如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果，操作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• C0120-Flag Tag 免疫沉淀试剂盒说明书-中文(1.16 MB)