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Flag Tag Agarose
产品编号 C0133
TargetMol 的 Flag Tag 琼脂糖凝胶将鼠源抗 DYKDDDDK（Flag）单克隆抗体高密度定向偶联到高度交联的琼脂糖凝胶微球表面，可特异性地与带有 Flag 标签的蛋白结合。
TargetMol 的 Flag Tag 琼脂糖凝胶可以用于蛋白质及蛋白质复合物的免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（Co-IP），也可用于抗体的纯化。本品适用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等来源的抗原样品。
TargetMol 的 Flag Tag 琼脂糖凝胶可以用于蛋白质及蛋白质复合物的免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（Co-IP），也可用于抗体的纯化。本品适用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等来源的抗原样品。
| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1 mL | 询价 | 5日内发货 | |
| 5 mL | 询价 | 5日内发货 | |
| 10 mL | 询价 | 5日内发货 |
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TargetMol 的所有产品和服务仅用于科学研究，不能被用于人体，我们也不向个人提供产品和服务。
产品特点
- 物理化学稳定性良好
- 配基不易脱落
- 耐用性强
- 使用便捷
产品应用
- 蛋白质及蛋白质复合物的免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（Co-IP）
- Flag标签蛋白纯化
产品信息
| Flag Tag 琼脂糖凝胶 | 特性 |
|---|---|
| 基质 | 高度交联的4%琼脂糖凝胶 |
| 粒径 | 30-100 μm |
| 配体 | 鼠源抗Flag单克隆抗体 |
| 结合能力 | ≥1.0 mg Flag标签蛋白/mL凝胶 |
| 浓度 | 50%（v/v） |
自备试剂
| 试剂 | 可选配方 |
|---|---|
| 洗涤缓冲液 Washing Buffer (1×) | TBST: 50 mM Tris-HCl，150 mM NaCl, 0.1%(v/v) Tween-20，pH7.4 |
| Flag多肽洗脱缓冲液 Flag Peptide Elution Buffer | PBS，1 mg/mL 3× Flag peptide (TP1274)，pH 7.4 |
| 酸性洗脱缓冲液 Acidity Elution Buffer | 0.1 M Glycine，0.1% (v/v) Tween-20，pH2.5 |
| 中和缓冲液 Neutralization Buffer | 1 M Tris-HCl, pH 9.0 |
操作说明
1. 细胞裂解液制备
选择合适的裂解液处理细胞样品，按照标准步骤制备细胞裂解液，置于冰上备用，或于-20℃长期保存。
2. 凝胶预处理
1)将琼脂糖凝胶用漩涡振荡器振荡1 min，使凝胶重新悬浮，取25~50 µL凝胶悬液放入1.5 mL EP管中。
2)向EP中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤，温和翻转EP管数次，使凝胶重新悬浮。
3)将EP管放入离心机，1000 rpm离心5 min，使凝胶沉降到离心管底部后弃去上清。重复上述洗涤步骤1次。
3. 免疫沉淀步骤
1)向EP管中加入制备好的含有Flag标签标记的蛋白样品，将EP管放在旋转混合仪上，在室温下孵育1-2 h，或在4℃下孵育2-4 h。
2)孵育结束后，1000 rpm离心5 min，收集凝胶，弃去或保存上清以供后续分析。
3)向EP管中加入1000 μL Washing Buffer进行洗涤，轻柔混匀5∽10 min。1000 rpm离心5 min，收集凝胶，弃去上清。再重复洗涤2次。
4. 抗原洗脱
提供以下几种抗原洗脱方案，用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入100 μL SDS-PAGE Loading Buffer（自备），混合均匀，95℃加热5 min。然后进行离心分离凝胶，收集上清液，进行SDS-PAGE检测。
2)中性洗脱法：向EP管中加入50 μL Flag Peptide Elution Buffer，置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min（低于37℃时需适当延长孵育时间）。然后进行离心分离凝胶，收集上清液。为提高抗原回收率，可重复以上步骤。
3)酸性洗脱法：向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer，置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行离心分离凝胶，收集上清液。如需中和酸性洗脱液，可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer，调整pH至中性。
保存条件
4℃，2年。
注意事项
- 凝胶应保存在储存溶液中，防止干燥。
- 在从保存管中取出琼脂糖凝胶之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
- 操作者可根据实际需求，利用抗体结合反应步骤和抗原结合反应步骤中收集的上清液，检测抗体、抗原与凝胶的结合情况。
- 在IP实验中，不同类型的抗体和抗原结合的亲和力会有所不同。如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果，操作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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