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Flag Tag Agarose

Flag Tag Agarose

产品编号 C0133
TargetMol 的 Flag Tag 琼脂糖凝胶将鼠源抗 DYKDDDDK(Flag)单克隆抗体高密度定向偶联到高度交联的琼脂糖凝胶微球表面,可特异性地与带有 Flag 标签的蛋白结合。

TargetMol 的 Flag Tag 琼脂糖凝胶可以用于蛋白质及蛋白质复合物的免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP),也可用于抗体的纯化。本品适用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等来源的抗原样品。
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TargetMol 的所有产品和服务仅用于科学研究,不能被用于人体,我们也不向个人提供产品和服务。

Handling Instruction | TargetMol 产品特点

  • 物理化学稳定性良好
  • 配基不易脱落
  • 耐用性强
  • 使用便捷

Handling Instruction | TargetMol 产品应用

  • 蛋白质及蛋白质复合物的免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)
  • Flag标签蛋白纯化

Handling Instruction | TargetMol 产品信息

Flag Tag 琼脂糖凝胶 特性
基质 高度交联的4%琼脂糖凝胶
粒径 30-100 μm
配体 鼠源抗Flag单克隆抗体
结合能力 ≥1.0 mg Flag标签蛋白/mL凝胶
浓度 50%(v/v)

Handling Instruction | TargetMol 自备试剂

试剂 可选配方
洗涤缓冲液 Washing Buffer (1×) TBST: 50 mM Tris-HCl,150 mM NaCl, 0.1%(v/v) Tween-20,pH7.4
Flag多肽洗脱缓冲液 Flag Peptide Elution Buffer PBS,1 mg/mL 3× Flag peptide (TP1274),pH 7.4
酸性洗脱缓冲液 Acidity Elution Buffer 0.1 M Glycine,0.1% (v/v) Tween-20,pH2.5
中和缓冲液 Neutralization Buffer 1 M Tris-HCl, pH 9.0

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

1. 细胞裂解液制备
选择合适的裂解液处理细胞样品,按照标准步骤制备细胞裂解液,置于冰上备用,或于-20℃长期保存。

2. 磁珠预处理
1)将琼脂糖凝胶用漩涡振荡器振荡1 min,使磁珠重新悬浮,取25~50 µL凝胶悬液放入1.5 mL EP管中。
2)向EP中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤,温和翻转EP管数次,使凝胶重新悬浮。
3)将EP管放入离心机,1000 rpm离心5 min,使凝胶沉降到离心管底部后弃去上清。重复上述洗涤步骤1次。

3. 免疫沉淀步骤
1)向EP管中加入制备好的含有Flag标签标记的蛋白样品,将EP管放在旋转混合仪上,在室温下孵育1-2 h,或在4℃下孵育2-4 h。
2)孵育结束后,1000 rpm离心5 min,收集凝胶,弃去或保存上清以供后续分析。
3)向EP管中加入1000 μL Washing Buffer进行洗涤,轻柔混匀5∽10 min。1000 rpm离心5 min,收集凝胶,弃去上清。再重复洗涤2次。

4. 抗原洗脱
提供以下几种抗原洗脱方案,用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入100 μL SDS-PAGE Loading Buffer(自备),混合均匀,95℃加热5 min。然后进行离心分离凝胶,收集上清液,进行SDS-PAGE检测。
2)中性洗脱法:向EP管中加入50 μL Flag Peptide Elution Buffer,置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min(低于37℃时需适当延长孵育时间)。然后进行离心分离凝胶,收集上清液。为提高抗原回收率,可重复以上步骤。
3)酸性洗脱法:向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer,置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行离心分离凝胶,收集上清液。如需中和酸性洗脱液,可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer,调整pH至中性。

Handling Instruction | TargetMol 保存条件

4℃,2年。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 凝胶应保存在储存溶液中,防止干燥。
  2. 在从保存管中取出琼脂糖凝胶之前,应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
  3. 操作者可根据实际需求,利用抗体结合反应步骤和抗原结合反应步骤中收集的上清液,检测抗体、抗原与凝胶的结合情况。
  4. 在IP实验中,不同类型的抗体和抗原结合的亲和力会有所不同。如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果,操作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
  5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。