Mouse Neutrophil Cell Isolation Kit (negative selection)

1. 小鼠细胞

2. 人源细胞

• 纯度高：分选细胞的纯度高，可达 95% 以上。
• 活性高：分选后细胞功能保持完好，无异常激活，无抗体和磁珠标记。
• 易操作：无需使用分离柱，通过磁力架即可实现目标细胞分离。
• 速度快：最快只需 30 min 即可获得目标细胞。

• 适用于从小鼠骨髓细胞、小鼠脾脏细胞、小鼠外周血及其混合样本中分选出中性粒细胞。

1. 制备单细胞悬液：将小鼠的骨髓、脾脏或外周血细胞采集到离心管中，并进行红细胞裂解。
   注：红细胞裂解的时间和用量可根据所用裂解液进行调整，少量红细胞的残留对后续分选和细胞纯度影响不大。通常，小鼠外周血的红细胞裂解需要更长的时间。骨髓细胞即使不进行红细胞裂解也可以直接分选，但红细胞含量较高时，分选的细胞纯度可能会有小于5%的轻微下降。
2. 裂解完成后，将细胞重悬于PBS中，并用70 μm的细胞筛网过滤。细胞计数完成后，500 g离心5 min。
   注：为避免组织碎片和细胞团块影响后续分选的纯度，细胞悬液需经过细胞筛网过滤。
3. 离心结束后，弃去上清液，将细胞重悬于分选缓冲液中，500 g离心5 min。再次将细胞重悬于分选缓冲液中，并调整细胞浓度至1×10^8个细胞/mL。
   注：分选缓冲液推荐配方：PBS，含有 2 mM EDTA和2% FBS；或PBS，2 mM EDTA和0.5% BSA。缓冲液需预先经0.22 μm滤膜过滤灭菌。
4. 将100 μL的细胞悬液（含1×10^7个细胞）加入1.5 mL无菌流式管底部，再加入2 μL Biotin-Antibody Mix，混匀后在4°C下孵育10 min。
   注：将细胞加入流式管底部时，避免沿管壁添加。若分选更多细胞，Biotin-Antibody Mix的用量需按比例增加。根据磁力架的不同，也可使用离心管进行细胞分选。
5. 细胞孵育结束后，加入分选缓冲液至1.5 mL，500 g离心5 min洗涤细胞。
   注：如果分选的细胞量较大，建议使用15 mL离心管，并将分选缓冲液补至5-10 mL后再进行离心。
6. 离心结束后，弃去上清液，将细胞重悬于100 μL分选缓冲液中。
   注：如果分选更多细胞，需按比例增加分选缓冲液的用量。
7. 磁珠预处理：涡旋振荡重悬磁珠，将所需量的磁珠移至1.5 mL离心管中，加入1 mL分选缓冲液，10000 g离心1 min，弃去上清。重复以上洗涤步骤一次。加入与原体积相同的分选缓冲液重悬磁珠。若使用20 μL磁珠进行清洗，则清洗后用20 μL分选缓冲液重悬。
8. 向细胞中加入20 μL经过预处理的Streptavidin Magnetic Beads，混合均匀，4°C下孵育10 min。
   注：若分选的细胞数量较多，Streptavidin Magnetic Beads的用量需按比例增加。例如，分选5×10^7个细胞时，在500 μL细胞悬液中加入10 μL Biotin-Antibody Mix和100 μL Streptavidin Magnetic Beads。若分选的细胞少于1×10^7个，则应将细胞悬液体积补至100 μL，并加入2 μL Biotin-Antibody Mix和20 μL Streptavidin Magnetic Beads。
9. 孵育结束后，在流式管中加入2.5 mL分选缓冲液，用移液器轻轻吹打混匀5次，避免剧烈振荡或上下颠倒混匀。
10. 将装有细胞的流式管置于磁力架上静置5 min。
11. 将细胞悬液轻轻倒入无菌离心管中，倒出过程中流式管保持在磁力架上。500 g离心5 min，弃去上清，收集细胞。
12. 根据实验要求洗涤细胞后，将其重悬于所需的缓冲液或培养基中，便可用于后续的分子生物学或细胞生物学实验。

4℃，2年。

1. 避免冷冻试剂盒各组分。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
2. 在从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
3. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。