Mag-Fluo-4 AM, a fluorescent Ca 2+ chelator, exhibits high affinity for calcium and is specifically designed to detect intracellular calcium ions. It features high sensitivity and low cytotoxicity. The compound's AM acetylmethyl ester form enhances cellular entry, and once inside, it is cleaved by intracellular esterases. This allows it to remain in the cell and bind to calcium ions, resulting in strong fluorescence [1].

Mag-Fluo-4 AM 工作液的配制：用无水DMSO稀释Mag-Fluo-4 AM配制成10 mM的储存液，储存液建议分装后于 -20℃ 或 -80℃避光保存。储存液用预热好的HBSS稀释成1-10 μM的Mag-Fluo-4 AM工作液，根据实际情况调整浓度，现用现配。

细胞染色 (悬浮细胞)：离心收集细胞，用PBS洗涤两次，每次5分钟，细胞密度1×10^6/mL。加入1 mL Mag-Fluo-4 AM工作液，室温孵育5-30分钟。400 g离心3-4分钟，弃去上清。用PBS洗涤细胞两次，每次5分钟。用1 mL HBSS重悬细胞后，使用荧光显微镜或流式细胞仪观察。

细胞染色 (贴壁细胞)：将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上，从培养基中移出盖玻片，吸除多余培养基。加入100 μL染料工作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，孵育5-30分钟。吸去染料工作液，用培养基洗2-3次，每次5分钟，使用荧光显微镜观察。