GI254023X is a MMP9 and ADAM10 inhibitor with IC50 values ​​of 2.5 and 5.3 nM, respectively. GI254023X can also significantly inhibit the proliferation of Jurkat cells and induce apoptosis.

MMP9:2.5 nM (cell free), ADAM10:5.3 nM (cell free)

方法： GI254023X （5 μM，4,24,48,72小时）处理小鼠间皮瘤细胞，通过 CYQUANT 分析测量 AB12和 PM27细胞增殖；通过 FACS 分析测量细胞周期不同阶段（G1、S 或 G2）中 AB12 或 PM27 细胞百分比并进行伤口愈合测定，研究其对间皮瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。
结果：GI254023X 对两种细胞的增值没有影响；GI254023X处理的小鼠间皮瘤细胞在 transwell 腔室中表现出较弱的迁移特性；GI254023X在小鼠间皮瘤细胞在划痕测定中（4、6 和 8 小时）显示迁移显着减少；球状体测定中测得的 AB12 和 PM27 细胞的侵袭也显着减少。[3]

方法：C57BL/6N 小鼠经受 TBI 或假手术的受控皮质冲击 （CCI） 模型，并在损伤急性期接受GI254023X或载体 （40,100 mg/kg，腹膜内注射，TBI 后 30 分钟和 24 小时），定量PCR测定脑内mRNA以及一些炎症因子的表达，研究其对实验性创伤性脑损伤 （TBI） 后的小鼠神经学和组织病理学结果的影响。
结果：GI254023X治疗并未改善受伤后 1 至 7 天 （DPI） 的神经功能缺损，但与载体治疗相比，接受 GI254023X 治疗的动物表现出更小的脑损伤。通过定量 PCR 测定脑 mRNA 表达表明，TBI 诱导的 Adam10 和 Adam17 的上调不受 GI254023X 的影响，但基质金属蛋白酶基因 Mmp2 和 Mmp9 的上调减弱；GI254023X还减轻了促炎标志物 Il6、Trfa 和 Lcn2 的上调，但没有减轻泛小胶质细胞标志物 Aif1、M2 小胶质细胞标志物 Arg1 和反应性星形胶质细胞标志物 Gfap 的上调。[1]

Cell death is quantified based on plasma membrane permeabilization. When applying the ADAM10 (a-secretase) inhibitor GI254023X (5 mM), slices are cultured in the serum-/glucose-free medium for 48 h containing the inhibitor or its respective carrier (DMSO) as control. Round circles of identical size (? 500mm) are positioned in equivalent locations within the CA1 region of each hippocampus image and all PI-stained cells are counted using the software. Cell viability assays are performed with a commercial kit according to the manufacturer's instructions. The assay quantitates ATP levels, an indicator of metabolically active cells, photometrically with a fluorescence plate reader. Additionally, the live-dead cell staining kit are applied according to the manual. Cells are simultaneously stained with green fluorescent calcein-AM (4mM; ex/em: 495/515 nm) to detect intracellular esterase activity (viable cells) and red fluorescent ethidium homodimer-3 (2mM; ex/em: 530/635 nm) to indicate loss of plasma membrane integrity (dead cells) [3].